西南大学荣昌校区第1页，共39页，星期日，2025年，2月5日目的与要求掌握动物血样的采取与抗凝方法。掌握血红蛋白测定、红细胞及白细胞计数的操作方法与注意事项。第2页，共39页，星期日，2025年，2月5日一、血样的采取与抗凝1、血样的采取①采血前的准备：采血用应事先消毒灭菌、干燥处理。采血部位应剪毛按常规消毒。②少量用血，一般可在耳尖、冠顶及静脉末梢等处进行采取。③多量用血，大动物可在颈静脉处进行采取；猪可在前腔静脉处采取；禽类在翅内静脉处采取，必要时可进行心脏穿刺采取。小动物一般采用心脏采血。第3页，共39页，星期日，2025年，2月5日各种动物的采血部位采血部位畜种采血部位畜种颈静脉马、牛、羊耳静脉猪、羊、犬、猫、实验动物前腔静脉猪翼下肱静脉家禽隐静脉犬、猫、羊蹼间静脉鸭、鹅前肢头静脉犬、猫、猪冠或肉髯鸡心脏兔、家禽、豚鼠断尾猪、实验动物第4页，共39页，星期日，2025年，2月5日第5页，共39页，星期日，2025年，2月5日2、血样的抗凝兽医临床常用的抗凝剂、使用方法及用图，见下表。抗凝剂抗凝机制常用浓度使用方法用途肝素阻止凝血酶元转化为凝血酶而阻止血凝0.5～1%溶液配制后应及时使用，每10ml血液加入0.1～0.2ml。适用于多数血液实验诊断检验，不宜用于血涂片检查。柠檬酸钠（枸橼酸钠）与钙离子形成非离子的可溶性化合物而阻止血凝3.8%溶液每10ml血液加入1ml。适用于红细胞沉降率、输血用抗凝，但不宜用于血液生化指标测定。EDTA-Na2螯合血中钙离子而阻止血凝10%溶液每10ml血液加入0.1～0.2ml。适用与一般血液学检查，不宜用于钠、钙的测定。草酸盐合剂（草酸铵＋草酸钾）与钙离子结合，形成不溶解的草酸钙而阻止血凝1～2%的草酸盐溶液取此液先作抗凝瓶。1ml此液可抗凝10ml血样（制作抗凝瓶应小于80℃）。有毒不能用于输血的抗凝，不宜用于白细胞分类计数与血小板计数。肝素第6页，共39页，星期日，2025年，2月5日血液学检查项目与采血后可保存的时间检查项目保存时间（h）检查项目保存时间（h）白细胞计数2～3血红蛋白含量48红细胞计数24红细胞压积容量24血小板计数1红细胞沉降速率2～3网织红细胞计数2～3白细胞分类计数1～2第7页，共39页，星期日，2025年，2月5日二、红细胞计数（RBC）：显微镜计数法1、原理血液经200倍稀释后，充入血细胞计数板，用显微镜观察，计数一定容积内的红细胞数并换算成每升血液中的红细胞数。2、器材与试剂改良纽巴氏计数板、盖玻片、沙利氏吸管、5ml吸管、试管、小玻棒、显微镜、计数器、0.85%氯化钠稀释液。第8页，共39页，星期日，2025年，2月5日3、方法①用5毫升吸管准确吸稀释液2毫升于试管中，用沙利氏吸管吸取血样10微升，用脱脂棉擦去沙利氏吸管外壁多余的血液后插入试管底部，轻轻压出血液于稀释液中，再用上清液吸、吹数次，以洗出沙利氏管内黏附的血细胞，充分混匀后备用。②将稀释后的血样用小玻棒取一滴，置于计数板与盖玻片交界的边缘，让其自然浸入，使稀释血样扩散入计数室内，静置2～3分钟，镜检。③计数时用低倍镜，依次计数中央大方格内的四角和正中5个中方格，共80个小方格的红细胞数。为避免重复和遗漏，计数时应按一定顺序进行。注意压在双线上的红细胞，遵守“数左不数右，数上不数下”计数法则。第9页，共39页，星期日，2025年，2月5日4、计算方法每mm3血液内红细胞总数=5个中方格内红细胞数×5×10×200×106=5个中方格内红细胞数×1010单位：个/升式中×5—5个中方格换算成1个大方格×10—1个大方格容积为0.1微升，换算成1.0微升×200—血液的稀释倍数×106—由微升换算成升注意防凝、防溶、取样正确。第10页，共39页，星期日，2025年，2月5日5、正常参考值健康动物除山羊的红细胞数较多外，其他动物的红细胞数约为6.0×1012～8.0×1012/L。6、临床意义①相对增多：脱水、急性胃肠炎、肠便秘、渗出性胸膜炎、渗出性腹膜炎、某些传染病；②绝对增多：红细胞增多症，见于代偿性机能不全的心脏病及慢性肺部疾病；③减少：各种贫血、出血性、溶血性、骨髓造血功能不全性贫血、营养不良性贫血、继发性