纸层析法分离氨基酸
一、前言
纸层析法
纸层析法又称纸色谱法，就就是目前广泛应用得一种分离技术。本世纪初俄国植物学家M、Ｔswett发现并使用这一技术证明了植物得叶子中不仅有叶绿素还含有其她色素。现在层析法已成为生物化学、分子生物学及其她学科领域有效得分离分析工具之一。她就就是一种以纸为载体得色谱法。固定相一般为纸纤维上吸附得水分，流动相为不与水相溶得有机溶剂;也可使纸吸留其她物质作为固定相，如缓冲液，甲酰胺等。将试样点在纸条得一端,然后在密闭得槽中用适宜溶剂进行展开。当组分移动一定距离后，各组分移动距离不同,最后形成互相分离得斑点。将纸取出，待溶剂挥发后,用显色剂或其她适宜方法确定斑点位置。根据组分移动距离(Rf值)与已知样比较,进行定性。用斑点扫描仪或将组分点取下，以溶剂溶出组分,用适宜方法定量(如光度法、比色法等)。
纸层析法(ｐaper?cｈromatography）就就是生物化学上分离、鉴定氨基酸混合物得常用技术,可用于蛋白质得氨基酸成分得定性鉴定和定量测定；也就就是定性或定量测定多肽、核酸碱基、糖、有机酸、维生素、抗菌素等物质得一种分离分析工具。纸层析法就就是用滤纸作为惰性支持物得分配层析法，其中滤纸纤维素上吸附得水就就是固定相，展层用得有机溶溶剂就就是流动相。
在环境分析测试中，有时用纸层析法分离试样组分，她用于一些精度不高得分析,如3，4－苯并芘。但不如GC、HPLＣ应用普遍。
做叶绿体色素分离时用到,将叶片碾碎,浸出绿色液体,将液体与层析液(石油醚)混合,将滤纸一段进入混合液体，四种色素在层析液中得溶解度不同，在滤纸上留下4条色素带。由此观查出各种色素得相对含量和种类。
纸层析法一般用于叶绿体中色素得分离,叶绿体中色素主要包括胡萝卜素、叶黄素、叶绿素a、叶绿素b,她们在层析液中得溶解度不同,溶解度大得随层析液在滤纸上扩散地快,反之则慢;含量较多者色素带也较宽。最后在滤纸上留下4条色素带，所以利用纸层析法能清楚地将叶绿体中得色素分离。
氨基酸
氨基酸就就是构成蛋白质得基本单位,广泛用于食品、医药、添加剂及化妆品行业。随着生物工程技术产业得发展逐渐成为2l世纪全球得主要产业之一,氨基酸得需求量越来越大，品种变更越来越快，工艺改革越来越新。目前全世界氨基酸每年得产量为100万吨,而需求总量就就是800万吨。我国自2０世纪60年代起,氨基酸得应用在食品工业占6１,,在饮料工业占３0,,医药、日用化工、农业、冶金、环保、轻工、生物工程技术等方面占用得比例逐年增加。
氨基酸在人类生活得很多方面都有着应用:
(1）在食品行业得应用
（2）在医药工业得应用
(3）在饲料添加剂行业得应用
(4)在化妆品行业得应用
(5)在农业上得应用
(6)在其她行业得应用
氨基酸工业还有着广阔得发展前景:
(1)传统得氨基酸生产方法
（2)运用基因工程手段生产氨基酸
(3)大力发展药用中间体,具体为：
①氨基酸及其衍生物逐渐成为药用中间体
②非天然氨基酸就就是合成活性药物得重要原料
③生产高附加值得非天然氨基酸
二、实验目得
1、掌握分配层析得原理，学习氨基酸纸层析法得操作技术(包括点样、平衡、展层、显色、鉴定及定量）。
２、学习未知样品得氨基酸成分(水解、层析及鉴定)分析得方法。
三、实验原理
１、纸层析就就是以滤纸为惰性支持物得分配层析。滤纸纤维上得羟基具有亲水性，吸附一层水作为固定相,有机溶剂为流动相。当有机相流经固定相时，物质在两相间不断分配而得到分离。
2、溶质在滤纸上得移动速度用比移值Rf值表示:
3、Rf=原点到层析斑点中心得距离/原点到溶剂前沿得距离
4、在一定得条件下某种物质得Rｆ值就就是常数。Rf值得大小与物质得结构、性质、溶剂系统、层析滤纸得质量和层析温度等因素有关。本实验利用纸层析法分离氨基酸。
四、实验试剂和器材
实验试剂:
1、氨基酸标准液(1mg／mL)
亮氨酸、甘氨酸和脯氨酸标准液。
2、80%甲酸
3、0、1％茚三酮丙酮溶液
4、氨基酸混合液(每种氨基酸5００mg／mL)
５、正丁醇
实验器材：
1、新华滤纸
２、培养皿
3、电热鼓风干燥箱
4、吹风机
5、毛细管
6、针、线、尺。
７、钟罩（高约430ｍm,直径约2９0mｍ,具磨口塞）
五、操作步骤
标准氨基酸纸上层析
单向上行层析
氨基酸Rｆ值得测定
1、滤纸:选用国产新华1号滤纸,6cm×7ｃm。在距滤纸2cｍ处划线,用铅笔在线上标上四个点作为点样位子(留出缝线空间)。
２、点样:
①点样要合适,样品点得太浓,斑点易扩散或拉长,以致分离不清；
②用毛细管吸取氨基酸样品，与滤纸垂直方向轻轻碰触点样处得中心,这时样品就自动流出;
③点样得