摘要
以绞股蓝发酵液为研究对象，鉴别其中的皂苷类活性成分，测定其总皂苷含量、体外抗氧化能力及抑菌活性。采用薄层色谱法，鉴别绞股蓝发酵前后的皂苷类活性成分；并采用香草醛-冰醋酸-高氯酸法显色，通过紫外分光光度法测定绞股蓝发酵粉末中总皂苷的含量。通过对绞股蓝发酵液自由基清除能力及Fe3+的还原能力的测定，对绞股蓝发酵液的体外抗氧化活性进行初步评价。绞股蓝发酵口服液对真菌的抑制效果强于实验所用细菌的抑制效果，绞股蓝经过发酵后具有一定的体外抗氧化活性，绞股蓝发酵液整体抗氧化活性强于绞股蓝未发酵液；而且对白色念珠菌具有较强的的抑菌效果。
关键词：绞股蓝发酵，薄层色谱，含量测定，体外抗氧化，抑菌活性
目录
TOC\o1-3\h\u第一章相关概念 1
1.1绞股蓝概述 1
1.2体外抗氧化 1
1.2.1还原力测定 1
1.2.2羟自由基清除能力 1
1.2.3超氧阴离子自由基的清除能力 1
1.3中药微生物发酵研究进展 2
1.4课题研究目的 2
第二章实验过程 3
2.1仪器与材料 3
2.1.1主要仪器 3
2.1.2主要材料 3
2.2实验方法 4
2.2.1绞股蓝发酵液的制备 4
2.2.2绞股蓝薄层色谱鉴别 4
2.2.3体外抗氧化实验 5
2.2.4绞股蓝发酵粉末中总皂苷含量测定 5
2.2.5绞股蓝发酵液体外抑菌活性的测定 6
2.3结果与分析 7
2.3.1绞股蓝薄层色谱鉴别 7
2.3.2体外抗氧化实验 9
2.3.3绞股蓝发酵粉末总皂苷含量测定 13
2.3.4绞股蓝发酵液体外抑菌活性的测定 13
第三章结论 16
参考文献 17
致谢 19
第一章相关概念
1.1绞股蓝概述
绞股蓝属于葫芦科、绞股蓝亚属的代表性植物，为多年生草质藤本植物。有小苦药，甘茶蔓、神仙草等多个别称。作为一种药用兼可食用的植物，绞股蓝在古代广泛应用于民间，最早记载于明代，在朱橚所撰写的《救荒本草》，徐光启所撰的《农政全书》和李时珍的《本草纲目》等有关书籍中均有对绞股蓝应用的记载。传统医学体系中，绞股蓝具有消炎解毒、清肺止咳化痰、补气养阴生津、养心安神的功效REF_Re\r\h[1]，中医现多用作滋补强壮药。而现代药理学研究证明，绞股蓝不仅具有降血糖、血压和血脂，防衰老、抗氧化、抗溃疡、增强免疫力、抗动脉粥样硬化等作用，还可以促进学习记忆，保护心脏、肝脏和血管等作用REF_Re\r\h[2]。绞股蓝的药用效果与人参皂苷相似REF_Re\r\h[3]，且含有多种化合物和多种微量元素，其中主要药效成分有皂苷类成分，包括比较常见的人参皂苷Rb1，F2，Rb3和Rd。
1.2体外抗氧化
1.2.1还原力测定
考察实验样品是否具有抗氧化性，常用还原力测定方法。当样品具有能提供将Fe3+还原成Fe2+的还原能力，使反应体系溶液颜色发生改变，可通过观察反应体系溶液吸光度值的变化，判断该实验样品的体外抗氧化能力。反应体系吸光度值可表示样品的还原力强弱，样品的还原力随吸光度值的变化而变化，成量效关系REF_Re\r\h[4]。
1.2.2羟自由基清除能力
羟自由基是存在于机体中的一类原子基团，是机体内的功能性基团，也是活性氧中最活泼的氧自由基之一，可通过电子转移、加成和脱氢等方式促使机体组织脂质过氧化和影响蛋白质、DNA的正常表达过程，从而引发组织细胞发生代谢异常，甚至导致细胞损伤或坏死。可通过测定羟自由基清除率反映样品具有何种程度的体外抗氧化活性REF_Re\r\h[5]。
体外制备羟自由基可采用过氧化氢与Fe2+混合，所产生的物质可与水杨酸混合发生反应，产物在510nm波长处具有特征吸收。若体系中加入的样品具有抗氧化性，水杨酸和羟自由基反应产生具有特征吸收的产物会减少，导致吸光度值较空白对照组弱REF_Re\r\h[6]。以此可计算绞股蓝样品溶液对羟自由基的清除率。
1.2.3超氧阴离子自由基的清除能力
超氧阴离子自由基是人体内的一种活性氧自由基，属于强氧化剂，对肌体细胞存在损伤作用，且蓄积过量可导致某些疾病的产生。通过观察绞股蓝样品溶液对超氧阴离子自由基的清除能力作为绞股蓝样品溶液的抗氧化活性的一个参考指标。在体外，保持弱碱性（如pH8.2）条件，超氧阴离子自由基会随着邻苯三酚的自氧化而产生，此时加入具有抗氧化活性的样品，减弱邻苯三酚自氧化程度，抑制超氧阴离子自