;;;;沉淀需要考虑的因素;;;;应用实例
;蛋白质在自然环境中通常是可溶的，
表面：大部分是亲水基团
内部：大部分是疏水基团;11;12;;;蛋白质在水中的溶解度不仅与中性盐离子的浓度有关，还与离子所带电荷数有关，高价离子影响更显著。
通常用离子强度表示对盐析的影响。。;;;;;020406080100;;;;;;;;;;思考题：为测定硫酸铵盐析法分离某种蛋白质的最佳硫酸铵浓度，请你设计一种工作程序测定盐析目的蛋白质的硫酸铵最佳浓度。;盐析范围的确定;需回收率高，采用40-80，回收率为94%，纯化倍数为1.9；
如需纯度高，采用48-65，回收率为75%，纯化倍数为3.0。;;有机溶剂对于许多蛋白质（酶）、核酸、多糖和小分子生化物质都能发生沉淀作用，是较早使用的沉淀方法之一，常用丙酮、异丙酮、乙醇、甲醇等。
定义：向水溶液中加入一定量亲水性的有机溶剂，降低溶质的溶解度，使其沉淀析出的分离纯化方法，称为有机溶剂沉淀法。
;;优点：分辨能力比盐析高,即一种生物分子或其他溶质只在一个比较窄的有机溶剂浓度范围内沉析；有机溶剂沸点低，容易除去或回收，产品更纯净，分离容易。
缺点：是某些具有生物活性的大分子容易引起变性失活，沉淀操作需在低温下进行；需用大量的有机溶剂，成本较高，且易燃易爆。;;;;;;;;;;;;应用实例-乙醇沉淀法提取柑橘皮中的果胶;提取液分离
将提取液加入1％的硅藻土作助滤剂，然后送入板框压滤机，过滤后得无色透明的果胶稀溶液，滤渣弃去。
浓缩
将过滤收集的滤液置于真空浓缩装置中，于75℃温度下浓缩，直至浓缩到果胶浓度为4％左右。
沉析
将浓缩液置于搪瓷桶中，并冷至室温，然后乙醇以喷淋方式加至已浓缩好的果胶溶液中，乙醇含量控制在40-50％的范围内，不断搅动，果胶聚结成海绵状析出。
;分离
将果胶/乙醇混合物经1~2h静置后，送入板框压滤机过滤。收集滤饼(果胶)，然后用80％乙醇溶液洗涤滤饼1~2次，再用95％的乙醇洗涤1~2次，洗完后压干。
干燥
将以上滤好的果胶置于真空干燥器中于55℃左右干燥，即得果胶纯品。
;应用实例-银耳多糖的??取纯化;实验试剂：
（1）1％复合酶制剂(含果胶酶、纤维素酶和中性蛋白酶食品级复合酶)；
（2）2％溴化十六烷基三甲铵（CTAB）配制：取2gCTAB溶于100mL蒸馏水中，摇匀备用；
（3）α-萘酚配制：α-萘酚5g溶于95％乙醇；
（4）5%三氯乙酸-正丁醇溶液；
（5）2mol／L的氢氧化钠溶液；
（6）0.5％甲苯胺乙醇溶液；
（7）2mol／L氯化钠溶液；
（8）2mol／L盐酸溶液；
（9）活性炭；硅藻土。
（10）1％融菌酶制剂；
（11）无水乙醇；
（12）浓硫酸；
（13）乙醚。;1.银耳预处理;2mol／L盐酸溶液调pH至6.3;等体积5％三氯乙酸-正丁醇溶液;2mol／L的氢氧化钠溶液调pH至7;加3倍量95％乙醇;;;;二、等电点沉淀;;63;;;应用
在生化产品的分离纯化过程中，常利用两性物质如氨基酸、蛋白质、多肽、酶、核酸等具有不同的等电点的特性来进行产品的分离纯化。
等电点沉淀只适用于水化程度不大，在等电点时溶解度很低的物质，如四环素等在等电点(pH=5.4)附近，难溶于水，能产生沉析；疏水性较大的蛋白质（如酪蛋白）
可以与其他沉淀方法结合使用
;应用实例等电点沉淀法分离牛乳中的酪蛋白;在沉淀中加入20ml乙醇，搅拌片刻，将全部的悬浊液转移至布氏漏斗中抽滤，用乙醇-乙醚混合液洗沉淀2次，最后用乙醚洗沉淀2次，抽干
将沉淀摊开在表面皿上，风干得酪蛋白纯品
准确称量，计算含量和收率
;;;;;;;;;;;课后作业;;;;;;;;;;;;;;;;;;;