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专题08基因工程（解析版）
考点01基因
考点01
一、单选题
1．（2025·山东日照·二模）PCR和琼脂糖凝胶电泳是基因工程中常用的两种技术，下列对其中所用试剂和操作的说法正确的是（）
A．PCR所用微量离心管、微量移液器、枪头都要进行高压蒸汽灭菌
B．PCR扩增前，应根据待扩增DNA片段的长度设置合适的延伸温度
C．需将扩增得到的PCR产物与内含核酸染料的缓冲液混合后进行加样
D．DNA分子较大时，可适当降低凝胶浓度来提高DNA分子的迁移速率
【答案】D
【难度】0.65
【知识点】PCR扩增的原理与过程、电泳鉴定
【分析】PCR的产物一般通过琼脂糖凝胶电泳来鉴定。在凝胶中DNA分子的迁移速率与凝胶的浓度、DNA分子的大小和构象等有关，凝胶中的DNA分子通过染色，可以在波长为300nm的紫外灯下被检测出来。
【详解】A、微量移液器不需要进行高压蒸汽灭菌，微量离心管、枪头都要进行高压蒸汽灭菌，A错误；
B、利用PCR技术进行扩增时，退火温度的设定是成败的关键，退火温度过高会使引物无法与模板的碱基配对，所以退火温度的设定与引物有关；延伸时间的设定与扩增片段的长度有关，B错误；
C、将扩增得到的PCR产物与凝胶载样缓冲液（内含指示剂）混合，再用微量移液器将混合液缓慢注入凝胶的加样孔内，C错误；
D、DNA分子在一定浓度琼脂糖凝胶中的迁移速率与DNA分子量对数成反比，分子越大则所受阻力越大，也越难于在凝胶孔隙中蠕行，因而迁移得越慢。当DNA分子较大时，可适当降低凝胶浓度来提高DNA分子的迁移速率，D正确。
故选D。
2．（2025·山东·二模）在DNA提取过程中应尽量避免导致DNA断裂和降解的各种因素，以保证DNA的完整性。下列操作与保证DNA完整性无关的是（????）
A．将洋葱切碎加入研磨液后再充分研磨
B．在上清液中加入预冷的酒精溶液
C．滤液在4℃冰箱中放置几分钟后再取上清液
D．加入酒精后用玻璃棒沿一个方向轻轻搅拌
【答案】A
【难度】0.65
【知识点】DNA的粗提取及鉴定的方法
【分析】DNA粗提取和鉴定的原理：1、DNA的溶解性：DNA和蛋白质等其他成分在不同浓度NaCl溶液中溶解度不同；DNA不溶于酒精溶液，但细胞中的某些蛋白质溶于酒精。2、DNA的鉴定：在沸水浴的条件下，DNA遇二苯胺会被染成蓝色。
【详解】A、将洋葱切碎后加研磨液充分研磨，目的是破碎细胞，使DNA释放，与避免DNA断裂降解无直接关联，A错误；
B、预冷酒精溶液利于DNA析出，且低温可减少DNA降解（低温抑制相关酶活性），与保证完整性有关，B正确；
C、4℃放置，低温抑制DNA酶活性，减少DNA降解，与保证完整性有关，C正确；
D、沿一个方向轻轻搅拌，避免剧烈操作导致DNA长链断裂，与保证完整性有关，D正确。
故选A。
3．（2025·山东泰安·二模）双向启动子可同时结合两个RNA聚合酶来驱动下游基因的表达，研究人员构建了如图所示的表达载体，以检测双向启动子作用效果。下列分析正确的是（）
A．表达载体中GUS基因和LUC基因转录时使用同一条DNA单链为模板
B．为连入GUS基因，需用SalⅠ和SphⅠ酶切已整合了双向启动子及LUC基因的质粒
C．在培养基中添加壮观霉素可筛选出成功导入表达载体的受体细胞
D．通过观察是否出现荧光和蓝色物质可检测双向启动子的作用效果
【答案】D
【难度】0.65
【知识点】遗传信息的转录、基因表达载体的构建、目的基因的检测与鉴定
【分析】基因工程技术的基本步骤：（1）目的基因的获取：方法有从基因文库中获取、利用PCR技术扩增和人工合成；（2）基因表达载体的构建：是基因工程的核心步骤，基因表达载体包括目的基因、启动子、终止子和标记基因等；（3）将目的基因导入受体细胞：根据受体细胞不同，导入的方法也不一样。将目的基因导入植物细胞的方法有农杆菌转化法、基因枪法和花粉管通道法；将目的基因导入动物细胞最有效的方法是显微注射法；将目的基因导入微生物细胞的方法是感受态细胞法；（4）目的基因的检测与鉴定：分子水平上的检测：个体水平上的鉴定：抗虫鉴定、抗病鉴定、活性鉴定等。
【详解】A、转录是从子链（mRNA）5→3方向进行的，由图可知，双向启动子位于GUS基因和LUC基因之间，所以GUS基因和LUC基因转录时的模板链不是DNA分子的同一条链，A错误；
B、如果用SphI酶切已整合了双向启动子及LUC基因的质粒时就会破坏LUC基因，B错误；
C、T-DNA中含有潮霉素抗性基因，而不包含壮观霉素抗性基因，因此可以通过在培养基中添加潮霉素来筛选成功导入表达载体的受体细胞，C错误；
D、双向启动子如果正常表达，就会合成荧光素