组织和细胞培养技术;消毒和灭菌;1.紫外线消毒
紫外线是一种低能量的电磁辐射,可杀死多种微生物。紫外线的直接作用是通过破坏微生物的核酸及蛋白质等而使其灭活,间接作用是通过紫外线照射产生的臭氧杀死微生物。直接照射培养室消毒,用法简单,效果好。
紫外灯的消毒效果同紫外灯的辐射强度和照射剂量呈正相关,辐射强度随灯距离增加而降低,照射剂量和照射时间呈正比。
紫外灯不仅对皮肤、眼睛伤害,且对培养细胞与试剂等也产生不良影响,因此,不要开着紫外等操作。
;2.高温湿热灭菌
压力蒸汽灭菌是最常用的高温湿热灭菌方法。对生物材料有良好的穿透力,能造成蛋白质变性凝固而使微生物死亡。布类、物、璃器皿、属器皿、胶和某些培养液都可以用这方法灭菌。
不同压力蒸汽所达到的温度不同,不同消毒物品所需的有效消毒压力和时间不同。从压力蒸汽消毒器中取出消毒好的物品(不包括液体),应立即放到60-70℃烤箱内烘干,再贮存备用,否则,潮湿的包装物品表面容易为微生物污染。
;3.高温干热灭菌
干热灭菌主要是将电热烤箱内物品加热到160℃以上,并保持90-120分钟,杀死细菌和芽孢,达到灭菌目的。主要用于灭菌玻璃器皿(如体积较大的烧杯、培养瓶)、金属器皿。
干热灭菌后要关掉开关并使物品逐渐冷却后在打开,切忌立即打开,以免温度骤变而使箱内的玻璃器皿破裂。干烤箱内物品间要有空隙,物品不要靠近加热装置。
烧灼也是灭菌方法之一,常利用台面上的酒精灯的火焰对金属器皿及玻璃器皿口缘进行烧灼消毒。
;4.过滤除菌
是将液体或气体用微孔薄膜过滤,使大于孔径的细菌等微生物颗粒阻留,从而达到除菌目的。在体外培养时,过滤除菌大多用于遇热容易变性而失效的试剂或培养液。目前,大多实验室采用微孔滤膜滤器除菌。关键步骤是安装滤膜及无菌过滤过程。
;新洁而灭,其0.1%水溶液可对器械、皮肤、操作表面进行擦拭和浸泡消毒。
;抗生素消毒;第三章细胞培养液;水与平衡盐溶液;细胞培养基的基本要求;2单糖:培养中的细胞可以进行有氧与无氧酵解,六碳糖是主要??源。此外六碳糖也是合成某些氨基酸、脂肪、核酸的原料。细胞对葡萄糖的吸收能力最高,半乳糖最低。体外培养动物细胞时,几乎所有的培养基或培养液中都以葡萄糖作为必含的能源物质。
;3维生素:主要扮演辅酶、辅基的角色,必不可少。生物素、叶酸、烟酰胺、泛酸、吡哆醇、核黄素、硫胺素、维生素B12都是培养基常有的成分。
4无机离子与微量元素:细胞生长除需要钠、钾、钙、镁、氮和磷等基本元素,还需要微量元素,如铁、锌、硒、铜、锰、钼、钒等。
;细胞培养基的基本要求;细胞培养基的基本要求;细胞培养基的基本要求;天然细胞培养基;血清;血清主要作用;细胞培养中使用血清的缺点;血清质量的鉴定;血清判断;血清的使用和储存;合成细胞培养基;葡萄糖和谷胺酰胺的合理使用;常用细胞培养基;第27页,共48页,星期日,2025年,2月5日;第28页,共48页,星期日,2025年,2月5日;第29页,共48页,星期日,2025年,2月5日;干粉培养基的配制;干粉培养基的配制方法;无血清技术及其培养基;无血清培养基的基本配方;使用方法;使用方法;使细胞适应无血清培养基的方法;使细胞适应无血清培养基的方法;使用无血清培养基的优点;无蛋白培养基;限定化学成分培养基;其他细胞培养用液;平衡盐溶液;平衡盐溶液配制图;消化液;消化液;消化液;pH调整液;pH调整液