植物组织中维生素C含量测定
维生素C(又称抗坏血酸，Vc)是植物材料中普遍存在的一类酸性、还原性物质，也是维
持人类健康所必需的维生素类物质之一。维生素C含量的多少与果蔬的品质、营养价值、
抗病及抗衰老能力直接相关。所以，研究中经常需要测定维生素C的含量。
维生素C可分为还原型和脱氢型两种。根据其具有还原性的性质，有多种方法可以测
定维生素C含量。此处介绍三种方法：2，6—二氯靛酚滴定法、荧光比色法和钼蓝比色法。
前者用于测定还原型维生素C，后两种用于测定总维生素C含量。
三、钼蓝比色法
【原理】
钼酸铵在SO2-和PO3-存在下与维生素C反应，生成蓝色络合物(钼蓝)，在760nm处
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有最大吸收。当维生素C浓度在2～40／μg·mL-1范围内，符合朗伯-比尔定律。新鲜植物
样品中的还原糖及常见的还原物质不干扰测定，而且反应迅速，专一性好。
【仪器设备】
1．分光光度计。2．匀浆器或玻璃研钵。
3．25mL具塞刻度试管。4．100mL容量瓶。
5．刻度吸液管。6．离心管。
7．离心机。
【试剂】
1．5％钼酸铵溶液：称取5g钼酸铵溶于蒸馏水中，并定容至100mL。
2．草酸—EDTA溶液：称取6．30g草酸和0．75gEDTA—Na2溶于蒸馏水中并定容
至l000mL。
3．5％(体积分数)HSO。
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4．偏磷酸一乙酸溶液：取棒状偏磷酸3g加20％冰醋酸48mL，溶解后加蒸馏水稀释
至100mL(必要时过滤)，在冰箱中可保存3。
5．维生素C标准溶液：精确称取分析纯维生素C100mg，置100mL容量瓶中，加适
量草酸—EDTA溶液溶解后，再用该溶液定容到100mL刻度，即成1mg·mL-l之标准液，
此溶液随配随用(如果维生素C纯度不够，应进行标定)。
【材料】
各种新鲜植物组织或器官。
【方法步骤】
1．制作标准曲线：取7支25mL具塞刻度试管，按下表加入各种试剂：
试剂试管号
123456
维生素C标准液／mL00.20.40.60.81.0
草酸—EDTA／mL5.04.84.64.44.24.0
偏磷酸一乙酸／mL0.50.50.50.50.50.5
1：19HSO／mL1.01.01.01.01.01.0
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5％钼酸铵／mL2.02.02.02.02.02.0
维生素C含量／mg020406080100
加完试剂摇匀后，置30℃水浴中保温15min，用蒸馏水稀释到25mL刻度，将溶液混
匀，用1号空白管调零，在760nm波长下比色，记录吸光度，以标准维生素C含量为横坐
标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。
2．样品提取与测定：称取小麦叶片或其他植物组织2～5g(根据维生素C含量而定)，
加5mL草酸EDTA溶液研磨成匀浆，并仔细转入25mL容量瓶中，再用提取介质冲洗研钵
及研锤2～3次，冲洗液合并于25mL容量瓶中。取一部分匀浆液经3000r/min离心10min
后，取1mL上清液与标准管同法测定。若样品显色液中出现沉淀时，可过滤后进行比色，