2.RNA变性RNA本身只有局部的双螺旋区，所以变性行为所引起的性质变化没有DNA那样明显。利用紫外吸收的变化，可以检测核酸变性的情况。因为天然状态的DNA在完全变性后，紫外吸收(260nm)值增加25－40%.而RNA变性后，约增加1.1%。第30页，共58页，星期日，2025年，2月5日3.DNA的热变性和解链温度（Tm）用加热的方法使DNA变性叫做热变性。DNA的变性过程是突变性的，它在很窄的温度区间内完成。因此，通常将DNA的变性达到50%时，即增色效应达到一半时的温度称为DNA的解链温度（meltingtemperature,Tm）,Tm也称熔解温度或DNA的熔点。一般DNA的Tm值在70-85?C之间第31页，共58页，星期日，2025年，2月5日DNA的变性温度：加热DNA溶液，使其对260nm紫外光的吸收度突然增加，达到其最大值一半时的温度，就是DNA的变性温度（融解温度，Tm）。第32页，共58页，星期日，2025年，2月5日Tm的高低与DNA分子中G+C的含量有关，G+C的含量越高，则Tm越高。DNA两股之间的吸引力不同：CG之间有3个氢键，而AT之间2个。第33页，共58页，星期日，2025年，2月5日G和C的含量高，Tm值高。因而测定Tm值，可反映DNA分子中G、C含量，可通过经验公式计算：（G+C)%=(Tm-69.3)X2.44第34页，共58页，星期日，2025年，2月5日DNA变性第35页，共58页，星期日，2025年，2月5日4、核酸的复性变性DNA在适当的条件下，两条彼此分开的单链可以重新缔合成为双螺旋结构，这一过程称为复性。DNA复性后，一系列物理、化学性质将得到恢复。DNA复性的程度、速率与复性过程的条件有关。第36页，共58页，星期日，2025年，2月5日将热变性的DNA骤然冷却至低温时，DNA不可能复性。但是将变性的DNA缓慢冷却时，可以复性，这一过程也叫退火（annealing)。分子量越大复性越难。浓度越大，复性越容易。此外，DNA的复性也与它本身的组成和结构有关。复性反应的速度用Cot1/2表示。Co为变性DNA复性时的浓度，t为时间，以秒表示。第37页，共58页，星期日，2025年，2月5日DNA的复性定义恢复到天然双螺旋结构的现象复性的条件Ⅰ.足够高的盐浓度Ⅱ.适当的温度Ⅲ.恰当的复性时间第38页，共58页，星期日，2025年，2月5日DNA复性第39页，共58页，星期日，2025年，2月5日5、核酸的杂交（hybridization）杂交的基础是DNA的复性。热变性的DNA单链，在复性时并不一定与同源DNA互补链形成双螺旋结构，它也可以与在某些区域有互补序列的异源DNA单链形成双螺旋结构。这样形成的新分子称为杂交DNA分子。DNA单链与互补的RNA链之间也可以发生杂交。核酸的杂交在分子生物学和遗传学的研究中具有重要意义。第40页，共58页，星期日，2025年，2月5日两条来源不同的单链核酸（DNA或RNA），只要它们有大致相同的互补碱基顺序，经退火处理即可复性，形成新的杂种双螺旋，这一现象称为核酸的分子杂交。核酸杂交可以是DNA-DNA，也可以是DNA-RNA杂交。不同来源的，具有大致相同互补碱基顺序的核酸片段称为同源顺序。第41页，共58页，星期日，2025年，2月5日核酸的分子杂交第42页，共58页，星期日，2025年，2月5日核酸的杂交第43页，共58页，星期日，2025年，2月5日HybridizationofNucleicAcidsRNADNA1DNA2ProbeSouthernhybridizationNorthernhybridizationProbe:SmallDNAsegment第44页，共58页，星期日，2025年，2月5日利用核酸的分子杂交，可以确定或寻找不同物种中具有同源顺序的DNA或RNA片段。常用的核酸分子杂交技术有：原位杂交斑点杂交Southern杂交Northern杂交Western杂交第45页，共58页，星期日，2025年，2月5日核酸杂交的应用Southernblotting(Southern印迹)Northernblotting(Northern印迹)Westernblotting(Western印迹)第46页，共58页，星期日，2025年，2月5日在核酸杂交分析过程中，常将已知顺序的核酸片段用放射性同位