5、种龄(seedage)种龄是指种子罐中培养的菌丝体开始移入下一级种子罐或发酵罐时的培养时间。种龄年轻：接入发酵罐后，往往会出现前期生长缓慢、整个发酵周期延长、产物开始形成的时间推迟，甚至出现发酵异常情况；种龄过老：引起生产能力下降而菌丝过早自溶。原则：一般以处于对数生长期的菌丝体较为合适，细胞活力强，菌体浓度相对较大。具体需实验确定。第30页，共57页，星期日，2025年，2月5日舒琴，林产化学与工业，2004菌种为嗜碱性芽孢杆菌镜检：24小时多个杆菌首位相连成线形，处于繁殖旺盛期，30小时开始出现芽孢返回第31页，共57页，星期日，2025年，2月5日（四）种子质量控制1、种子质量标准2、影响种子质量的因素3、种子质量的控制措施４、种子质量异常分析第32页，共57页，星期日，2025年，2月5日①生化指标②检查菌丝形态、菌丝浓度和培养液外观（色泽、气味、浑浊度等）③检查有无杂菌污染④产物生成量⑤其他参数1、种子质量标准第33页，共57页，星期日，2025年，2月5日检测培养液中的糖氨基氮磷酸盐含量:萃取-磷钼蓝比色法pH值①生化指标3，5-二硝基水杨酸法斐林试剂法第34页，共57页，星期日，2025年，2月5日色泽、气味、浑浊度等单细胞：菌体健壮、菌形一致、均匀整齐，有的还要求有一定的排列或形态；霉菌、放线菌：菌丝粗壮、对某些染料着色力强、生长旺盛、菌丝分枝情况和内含物情况好。②检查菌丝形态、菌丝浓度和培养液外观第35页，共57页，星期日，2025年，2月5日缬霉素发酵液中氨基氮的测定氨基酸中的-NH3+基的pk值常在9.0以上，不能用一般的酸碱指示剂（包括酚酞），以氢氧化钠溶液作滴定测量。但可以用甲醛滴定法测量。在pH中性和常温条件下，甲醛迅速与氨基酸中氨基相互作用，使滴定终点移至pH9.0左右，在该过程中指示剂酚酞不与甲醛作用。pH9.0正是酚酞的变色范围，因此，可以用酚酞作为指示剂，以氢氧化钠溶液来滴定-NH3+基上的H+，每释放一个氢离子，就相当于一个氨基酸。第36页，共57页，星期日，2025年，2月5日反应如下R-NH3+H++R-NH2R-NH2+2CH3CHOR-N(CH2OH)2第37页，共57页，星期日，2025年，2月5日实验步骤1.将发酵液过滤，取滤液2.5mL于250mL三角瓶中，加蒸馏水约50mL,加甲基红指示剂2~3滴，加1mol/LHCl溶液1～2滴，使成红色，放置3min.2.以标准NaOH溶液滴定至刚好转橙黄色，读取此时滴定管刻度，加入12％中性甲醛10mL，放置5—10min。3.加入酚酞指示剂1mL，用标准NaOH溶液滴定至呈微红色为终点，读取此时滴定管刻度。两次读数之差即为所耗NaOH毫升数。第38页，共57页，星期日，2025年，2月5日结果计算NNaOH×VNaOH×14.01NH-N%=×1002.5单位：mg/100ml第39页，共57页，星期日，2025年，2月5日④产物生成量如，在抗生素发酵中，产物生成量是考察种子质量的重要指标，因为种子液中产物生成量的多少间接反映种子的生产能力和成熟程度。⑤其他参数：如某些酶的活力、种子罐的溶氧和尾气等。eg,土霉素生产的种子液中的淀粉酶活力与土霉素发酵单位有一定的关系。③检查有无杂菌污染第40页，共57页，星期日，2025年，2月5日种子的扩大培养第1页，共57页，星期日，2025年，2月5日教学目的：了解种子扩大培养的目的和制备过程；掌握优良种子应具备的条件；掌握种子制备技术；了解谷氨酸和青霉素生产的种子制备。教学重点、难点：发酵级数的确定及对发酵的影响；接种量的确定及对发酵的影响；影响种子质量的因素及其控制措施。第四节种子的扩大培养（2学时）第2页，共57页，星期日，2025年，2月5日种子的扩大培养1制备过程2实验室阶段3生产车间阶段4种子质量控制内容速览4.2种子制备技术概要4.1目的与要求4.3种子制备过程举例第3页，共57页，星期日，2025年，2月5日种子扩