实验一培养基母液的制备一、实验目的与意义学习和掌握培养基母液的配制方法。在配制培养基前，为了使用方便和用量准确，常常将大量元素、微量元素、铁盐、有机物质、激素类分别配制成比培养基配方需要量大若干倍的母液。当配制培养基时，只需要按预先计算好的量吸取母液即可。第31页，共62页，星期日，2025年，2月5日二、实验器材电光分析天平（感量为0.0001g）、扭力天平（感量为0.01g）、台秤（感量0.5g）、烧杯（500ml、100ml、50ml）、容量瓶（1000ml、100ml、50ml、25ml）、细口瓶（1000ml、100ml、50ml、25ml）、药勺、玻璃棒、电炉。三、实验药品NH4NO3、?KNO3?、CaCl2·2H2O?、?MgSO4·7H2O、KH2PO4?、?KI?、H3BO3?、MnSO4·4H2O、ZnSO4·7H2O、Na2MoO4·2H2O?、CuSO4·5H2O?、CoCl2·6H2O?、FeSO4·7H2O、Na2-EDTA·2H2O?、肌醇、烟酸?、?盐酸吡哆醇(维生素B6)??、盐酸硫胺素(维生素B1)?、甘氨酸?。第32页，共62页，星期日，2025年，2月5日四、实验步骤1、大量元素母液的配制各成分按照培养基成分表浓度含量扩大10倍，用感量为0.01g的扭力天平称取，用蒸馏水分别溶解，按顺序逐步混合。后用蒸馏水定容到1000ml的容量瓶中，即为10倍的大量元素母液。倒入细口瓶，贴好标签保存于冰箱中。配制培养基时，每配1L培养基取此液100ml。第33页，共62页，星期日，2025年，2月5日表1MS培养基大量元素母液制备序号药品名称培养基浓度（mg/L）扩大10称量(mg)?1NH4NO3165016500蒸馏水定容至1000ml2KNO31900190003MgSO4·7H2O37037004KH2PO417017005CaCl2·2H2O?4404400第34页，共62页，星期日，2025年，2月5日注意：(1)配制大量元素母液时，某些无机成分如Ca2+、SO42一、Mg2十和H2PO4一等在一起可能发生化学反应，产生沉淀物。为避免此现象发生，母液配制时要用纯度高的重蒸馏水溶解，药品采用等级较高的分析纯，各种化学药品必须先以少量重蒸馏水使其充分溶解后才能混合，混合时应注意先后顺序。特别应将Ca2+、SO42一、Mg2十和H2PO4一等离子错开混合，速度宜慢，边搅拌边混合。(2)CaCl2·2H2O要在最后单独加入，在溶解CaCl2·2H2O时，蒸馏水需加热沸腾，除去水中的CO2，以防沉淀。另外，CaCl2·2H2O放入沸水中易沸腾，操作时要防止其溢出。第35页，共62页，星期日，2025年，2月5日２、微量元素母液的配制MS培养基的微量元素无机盐由7种化合物（除Fe ）组成。微量元素用量较少，特别是?CuSO4·5H2O、?CoCl2·6H2O?，因此在配制中分微量Ⅰ、Ⅱ配制。按照表2，表3配方，用感量为0.0001g的电光分析天平称量，其它同大量元素。配制培养基时，每配制1L培养基，取微量Ⅰ10ml，微量Ⅱ１ml第36页，共62页，星期日，2025年，2月5日表2MS培养基微量Ⅰ的配制序号化合物名称培养基浓度（mg/L）扩大100倍称量(mg)1MnSO4·4H2O22.322302ZnSO4·7H2O8.68603H3BO36.26204KI0.83835CuSO4·5H2O?0.0252.56CoCl2·6H2O??0.0252.57Na2MoO4·2H2O02525第37页，共62页，星期日，2025年，2月5日3、铁盐母液的配制铁盐不是都需要单独配成母液，如柠檬酸铁，只需和大量元素一起配成母液即可。目前常用的铁盐是硫酸亚铁和乙二胺四乙酸二钠的螯合物，必须单独配成母液。这种螯合物使用起来方便，又比较稳定，不易发生沉淀。配制方法同上，直接用蒸馏水加热搅拌溶解。配制培养基时，配制1L取此液10ml。序号化合物名称培养基浓度（mg/L）扩大100倍称量(mg)1Na2-EDTA?37.337302FeSO4·7H2O27.82780表4MS铁盐母液的配制第38页，共62页，星期日，2025年，2月5日注意：在配制铁盐时，如果加热搅拌时间过短，会造成FeS04和Na2EDTA鳌合不彻底，此时若将其冷藏，FeS04会结晶析出。为避免此现象发生，配制铁盐母液时，FeS04和Na2EDTA应分别加热溶解