转基因技术动植物转基因方法
转基因技术转基因技术得步骤植物转基因方法动物转基因方法转基因技术得应用转基因技术得前沿发展我们身边得合成生物学转基因技术【DAWN_ZX】
【DAWN_ZX】转基因技术转基因技术得步骤STEP1:目得基因得获取
方法:(1)从基因文库中获取(2)利用PCR技术扩增目得基因(3)人工合成
【DAWN_ZX】转基因技术转基因技术得步骤STEP2:基因表达载体得构建
目得:使目得基因在受体细胞中稳定存在,并且可以遗传至下一代,使目得基因能够表达和发挥作用。
组成:目得基因＋启动子＋终止子＋标记基因
标记基因得作用:就是为了鉴定受体细胞中就是否含有目得基因,从而将含有目得基因得细胞筛选出来。常用抗生素基因。【启动子】就是一段有特殊结构得DNA片段,位于基因得首端,就是RNA聚合酶识别和结合得部位,能驱动基因转录出mRNA,最终获得所需得蛋白质。
【终止子】也就是一段有特殊结构得DNA片段,位于基因得尾端。
【DAWN_ZX】转基因技术转基因技术得步骤STEP3:将目得基因导入受体细胞
(1)导入植物细胞一般用农杆菌转化法,也可用基因枪法或花粉管通道法。(2)导入动物细胞一般用显微注射法。(3)导入微生物细胞一般用感受态细胞吸收DNA分子得方法。
【DAWN_ZX】转基因技术转基因技术得步骤STEP4:目得基因得检测和表达
1、检测转基因生物得染色体DNA上就是否插入了目得基因。方法:采用DNA分子杂交技术。
2、检测目得基因就是否转录出了mRNA。方法:采用用标记得目得基因作探针与mRNA杂交。
3、最后检测目得基因就是否翻译成蛋白质。方法:从转基因生物中提取蛋白质,用相应得抗体进行抗原－抗体杂交。
4、进行个体生物学水平得鉴定。
【DAWN_ZX】转基因食品转基因技术得步骤所用工具:分子手术刀——限制性核酸内切酶来源:从原核生物中分离纯化出来。
功能:能够识别双链DNA分子得某种特定得核苷酸序列,并且使每一条链中特定部位得两个核苷酸之间得磷酸二酯键断开,因此具有专一性。
结果:经限制酶切割产生得DNA片段末端通常有两种形式:黏性末端和平末端。
【DAWN_ZX】转基因技术转基因技术得步骤所用工具:分子缝合针——DNA连接酶
连接两个DNA片段得末端,形成磷酸二酯键。
【DAWN_ZX】转基因技术转基因技术得步骤所用工具:分子运输车——载体载体具备得条件:
①能在受体细胞中复制并稳定保存。
②具有一至多个限制酶切点,供外源DNA片段插入。
③具有标记基因,供重组DNA得鉴定和选择。
最常用得载体就是质粒,她就是一种裸露得、结构简单得、独立于细菌染色体之外,并具有自我复制能力得双链环状DNA分子。
其她载体:噬菌体得衍生物、动植物病毒。
【DAWN_ZX】转基因技术植物转基因方法载体介导法农杆菌介导法DNA直接导入法化学物质诱导法电激穿孔法脂质体法显微注射法基因枪法花粉管通道法病毒介导法
【DAWN_ZX】转基因技术植物转基因方法农杆菌介导法农杆菌就是普遍存在于土壤中得一种革兰氏阴性细菌,她能在自然条件下趋化性地感染大多数双子叶植物得受伤部位,并诱导产生冠瘿瘤或发状根。根癌农杆菌和发根农杆菌中细胞中分别含有Ti质粒和Ri质粒,其上有一段T-DNA,农杆菌通过侵染植物伤口进入细胞后,可将T-DNA插入到植物基因组中。因此,农杆菌就是一种天然得植物遗传转化体系。人们将目得基因插入到经过改造得T-DNA区,借助农杆菌得感染实现外源基因向植物细胞得转移与整合,然后通过细胞和组织培养技术,再生出转基因植株。近年来,农杆菌介导转化在一些单子叶植物(尤其就是水稻)中得到了广泛应用。
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【DAWN_ZX】转基因技术植物转基因方法基因枪介导转换法方法:利用火药爆炸或高压气体加速将包裹了带目得基因得DNA溶液得高速微弹直接送入完整得植物组织和细胞中,然后通过细胞和组织培养技术,再生出植株,选出其中转基因阳性植株即为转基因植株。优点:不受受体植物范围得限制,而且其载体质粒得构建也相对简单,就是目前转基因研究中应用较为广泛得一种方法。
【DAWN_ZX】转基因技术植物转基因方法花粉管通道法方法:授粉后向子房注射合目得基因得DNA溶液,利用植物得花粉管通道,将外源DNA导入受精卵细胞,并整合到受体细胞得基因组中,随着受精卵得发育而成为带转基因得新个体。该方法于80年代初期由我国学者周光宇提出,目前我国推广面积最大得转基因抗虫棉就就是用花粉管通道法培育出来得。优点:不依赖组织培养人工再生植株,技术简单,不需要装备精良得实验室,常规育种工作者易于掌握。
【DAWN_ZX】转基因技术动物转基因方法原核显微注射法精子介导得基因转移胚胎干