第1页，共26页，星期日，2025年，2月5日思考：“课题1--DNA的粗提取与鉴定”实验理想的材料是什么？“课题3--血红蛋白的提取和分离”这实验理想的材料又是什么？原因是？答：鸡的红细胞具有细胞核，含有DNA，便于进行DNA的提取，哺乳类动物成熟的红细胞无细胞核，结构简单，血红蛋白含量丰富便于提取血红蛋白。第2页，共26页，星期日，2025年，2月5日一、基础知识：（一）蛋白质分离原理（二）蛋白质分离的方法1）凝胶色谱法：又称分配色谱法2）电泳法（三）缓冲液的作用第3页，共26页，星期日，2025年，2月5日二、实验操作－－实验步骤血液组成成分（1）洗涤红细胞（2）释放血红蛋白（3）分离血红蛋白（4）透析血红蛋白1、样品处理3、纯化4、纯度鉴定2、粗分离SDS—聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定血红蛋白纯度凝胶色谱法进行纯化注意事项第4页，共26页，星期日，2025年，2月5日蛋白质提取与分离的依据－－蛋白质的物理化学性质差异：1.分子的形状、大小2.电荷性质和多少3.溶解度4.吸附性质5.对其他分子亲和力第5页，共26页，星期日，2025年，2月5日1.凝胶色谱法一些微小多孔的球体（内含许多贯穿的通道，具多孔的凝胶就叫分子筛）根据相对分子质量的大小分离蛋白质的方法（2）概念：（1）凝胶第6页，共26页，星期日，2025年，2月5日3、原理：当不同的蛋白质通过凝胶时，（）的蛋白质容易进入凝胶内部的通道，路程（），移动速度（），而（）的蛋白质无法进入凝胶内部的通道，只能在（）移动，路程（），移动速度（），相对分子质量不同的蛋白质因此得以分离。相对分子质量较小较长较慢相对分子质量较大凝胶外部较短较快总结：大分子经过路程短，流动快；小分子经过路程长，流动慢。第7页，共26页，星期日，2025年，2月5日洗脱：从色谱柱上端不断注入缓冲液，促使蛋白质分子的差速流动。混合物上柱洗脱大分子流动快小分子流动慢收集大分子收集小分子4、具体过程第8页，共26页，星期日，2025年，2月5日2．凝胶电泳法：1）原理：不同蛋白质的带电性质（正电荷或负电荷）、电量、分子形状和大小不同，在电场中受到的作用力大小、方向、阻力不同，导致不同蛋白质在电场中的运动方向和运动速度不同。2）影响蛋白质分子运动速度的因素电泳：带电粒子在电场的作用下发生迁移的过程第9页，共26页，星期日，2025年，2月5日3）常用电泳方法琼脂糖凝胶电泳聚丙酰胺凝胶电泳SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳在测定蛋白质分子量时通常用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳，使用时可选用一组已知分子量的标准蛋白同时进行电泳做对照，根据两者的电泳区带位置，利用相关计算公式算出相对分子量SDS带负电荷多的，因而掩盖了不同种蛋白质间的电荷的差别，使蛋白质迁移速率仅取决于分子大小。第10页，共26页，星期日，2025年，2月5日影响蛋白质分子运动速度的因素?决定运动方向决定运动速率电荷性质电荷量分子形状分子大小√√√√第11页，共26页，星期日，2025年，2月5日由弱酸和相应的强碱盐溶解于水中。如H2CO3/NaHCO3，NaH2PO4/Na2HPO4等缓冲溶液－－洗脱剂（1）作用：（2）配制：抵制外界酸碱对溶液pH的干扰而保持pH稳定。（3）在血红蛋白的提取和分离实验中用的缓冲液的原因？目的是利用缓冲液模拟细胞内的PH环境，保证血红蛋白的正常结构和功能。第12页，共26页，星期日，2025年，2月5日血液组成成分阅读思考：血液由______和________两部分组成。血细胞中________细胞数量最多，细胞的含量最高的化合物是_____________。该化合物是由_____________和____________构成的，其中每个亚基中都含有一个能与O2和CO2结合的______________________基团。血浆血