动物繁殖理论与生物技术;;?概念
动物胚胎移植(ET):是将一头优秀母畜配种后的早期胚胎用手术或非手术的方法取出,在显微镜下检出后,移植到另一头同种并且生理状态相同的母畜体内,使之继续妊娠发育为新个体的技术,也称借腹怀胎。
提供胚胎的个体——供体
接受胚胎的个体——受体; ?1890年剑桥大学WalterHeape从一头纯种安哥拉母兔取出2个4细胞胚胎,移植到一头纯种比利时母兔输卵管上端(用同种公兔交配后3h),结果生出了4只比利时种仔兔和2只纯种安哥拉仔兔。
这一结果说明早期发育的胚胎更换到另一个体的输卵管(或子宫角)内,如果胚胎的发育阶段和所处的环境条件相适应,它完全可以继续正常发育,并成长为一个新个体。;胚胎移植大事记;?ET开始于60年代,主要发展开始于70年代后期,先后在兔、绵羊、牛、马、山羊、猪等动物方面试验成功。
?目前以牛的ET工作做得最多,主要是高产奶牛和优良肉牛,特别是从国外进口的优良肉牛品种胚胎。
?目前我国的波尔山羊的ET达国际先进水平。
;2005年3月29日,通过胚胎移植技术,山西本地山羊产下两只纯种南非产波尔小羊羔。这是羊“妈妈”带着没有一点血缘关系的羊“孩子”在晒太阳。;1、充分发挥优良母牛的繁殖潜力
2、缩短世代间隔,及早进行后裔测定
3、提高生产效率,诱发肉牛产双胎。
4、代替种畜引种
5、保存品种的资源
6、作为研究手段
7、通过胚胎移植进行奶牛品种改良
8、利用胚胎移植进行纯种奶牛扩繁;(二)胚胎移植的原理;?3、胚胎移植不存在免疫问题。由于胎盘屏障的保护和妊娠时母体免疫机能发生的变化,胚胎可以在受体母畜子宫内存活,正常发育至分娩。
?4、胚胎的遗传特性不受受体母畜的影响。胚胎的遗传特性和性别在母畜体内受精时就已经决定了,受体母畜只是给移入的胚胎提供了一个孕育的环境,胚胎的遗传特性不受受体母畜的影响。;三、胚胎移植的基本原则;?2、胚胎发育期限。胚胎的采集和移植时间不能迟于周期黄体的寿命,更不能迟于开始附植时,一般在周期黄体开始退化前几天,在供体发情配种后3~8d内收集胚胎,受体也在相同时间接受ET。
?3、胚胎的质量。在胚胎收集和移植的全部操作过程中,胚胎不能受到任何不良因素(物理、化学、病原)的影响而危及生命力,经鉴定确认发育正常的胚胎才能移植。;四、胚胎移植的技术程序;1、供体母畜
不仅应具备优良的遗传品质,而且其生殖机能还需要处于较高的水平。牛、猪产后两个月以上才能作为供体。
2、受体母畜
虽不要求具有优良的遗传品质,但应该具有良好的繁殖性能和健康体态,体型中等以上。供体与受体的发情时间应该相同,前后差异不超过1d。必要是时对供、受体进行同期发情处理。;(二)供体的超数排卵;2、利用阴道栓人工控制卵泡波进行超排;(三)受体的同情发情;PGF2α有溶解黄体的作用,从而引起发情,所以只对卵巢上存在黄体的受体有效。
在情期第9天以后,注射PGF2α,常可在注射后2-3天内发情(WHY?)。
对于不能确定发情周期的受体,可采用间隔10-12天的两次注射法。
此方法方便可靠,但费用较高。
为何要进行两次注射?;s;2、孕激素处理法;(四)胚胎的采集;2、常规采卵法;母牛非手术冲卵示意图;牛的非手术法回收胚胎
a.冲卵液b.硬膜外麻醉c.插入子宫中的Foley管d.子宫颈;3、子宫体冲卵法;子宫角回收的液体较多,可以通过专用胚胎漏斗除去多余的冲卵液,在连续变倍解剖显微镜(实体显微镜)下进行检胚;
胚胎的质量评定:主要采用形态学方法,优质胚胎才能用于进行胚胎冷冻或移植。;胚胎评定;未受精卵或异常胚胎;2-cell;胚胎的降温:使胚胎停止发育,延长其体外生存时间
体外培养:将胚胎置于体温条件下,在培养液中,使其继续发育
胚胎冷冻:通过一定的处理程序,将胚胎降温冷冻后,保存于液氮中;第二节胚胎移植;重点应检查子宫和卵巢的异常情况以及子宫的紧张性,然后检查卵巢上黄体的发育情况(位置、大小),只有黄体发育良好者才能正式列为待移植母牛,并记录和在牛臀部标出黄体位于左右哪一侧。
牛站立保定于六柱栏保定架内,用2%盐酸利多卡因或普鲁卡因进行荐尾椎硬膜外麻醉,用18号针头,每只牛约5ml。;非手术移植;
;胚胎装管图;直肠检查黄体位置后,最好先作硬膜外腔麻醉,然后似人工授精般将胚胎用移植管通过子宫颈放入到与黄体同侧的子宫角的大弯或大弯深处内,或两侧子宫角各放一枚胚胎。;直肠把握法;思考题