动物繁殖理论与生物技术;;第一节卵母细胞与胚胎保存;(二)冷冻保存原理;此时可能发生两种情况:
(1)如果冷冻速度很慢,细胞膜内能充分的渗出,因此细胞内不能形成冰晶。;如果冷冻速度过慢,细胞就有充分的时间向细胞外渗透水分,使细胞内部溶质浓度增高,允许有更深的过冷度。结果细胞脱水,细胞皱缩,细胞内部长时间处于高浓度溶液(主要为电解质)状态下,这种高浓度的电解质作用于细胞膜,引起脂蛋白复合物的变性和部分类脂质的丢失,增加了细胞膜对阳离子的通透性,在细胞膜上形成一些小孔,解冻时,水大量进入细胞造成细胞渗透性休克损伤。;(2)如果冷冻速度过快,当温度下降至某一临界点,细胞内水分未能及时向外渗出,就会导致细胞内形成冰晶。在-5~-15℃细胞内液处于超冷状态时,如细胞尚未充分脱水,一旦结冰,冰晶将会迅速集聚,引起温度瞬间剧增,对细胞产生相当大的损伤性—冰晶损伤。;(三)解冻方法;第二节体外受精技术;试管动物技术即胚胎体外生产技术,是相对于体内胚胎而言的,是指卵母细胞在体外成熟后与获能的精子体外受精并分裂发育到桑椹胚或囊胚期(5-7天)的技术。;一、体外受精技术过程;2、活体采卵:是从活母畜的卵巢采集卵母细胞(优良品种)
B超引导法:借助超声波(B超)探头和屏幕的引导,从活母畜卵巢采集卵母细胞。操作员先将带有B超探头和采卵针的采卵器通过阴道插入子宫,同时通过将卵巢贴在探头上。根据B超屏幕所显示的卵泡位置,利用采卵针穿刺卵泡并同时抽吸卵母细胞。
;(二)卵母细胞的体外成熟;(三)卵母细胞的体外受精;(四)早期胚胎的体外培养;(五)影响体外受精的主要因素;(六)体外受精技术的应用前景;第三节性别控制技术;2、分离精子在畜牧业上的应用
目前分离精子市场处于供不应求的状况,分离精子的销路:
(1)是销售给牧场主,由牧场自行AI;
(2)是该公司为其下属农户的供体牛作超排处理后进行AI或活体采卵后IVF。;精子分离流程示意图;(二)胚胎的性别鉴定;(三)胚胎性别鉴定技术的应用前景;第四节动物克隆;;1938年汉斯·斯皮曼建议用成年的细胞核植入卵???的办法进行哺乳动物克隆
1962年约翰·格登宣布他用一个成年细胞克隆出一只蝌蚪,从而引发了关于克隆的第一轮辩论
1984年斯蒂恩·威拉德森用胚胎细胞克隆出一只羊。这是第一例得到证实的克隆哺乳动物
1996年第一个用成年哺乳动物细胞克隆出的个体----克隆羊多莉出世了1997年克隆出小鼠
2000年美国科学家用无性繁殖技术成功地克隆出一只猴子泰特拉;猪:2000年3月,5只苏格兰PPL小猪;8月,Xena,雌性
牛:2001年,Alpha和Beta,雄性
猫:2001年底,CopyCat(CC),雌性
兔:2003年3-4月分别在法国和朝鲜独立地实现;
骡:2003年5月,爱达荷Gem,雄性;6月,犹他先锋,雄性
鹿:2003年,Dewey马:2003年,Prometea,雌性
狗:2005年,韩国首尔大学实验队,史纳比
猪:2005年8月8日,中国第一头供体细胞克隆猪;二、细胞核移植的方法;SkinBiopsyReadyforInitialProcessing
Afterinspectionandcataloging,the6millimeterskinbiopsy(abouthalfthesizeofashirtbutton)isremovedfromtheshippingtubeandmediumandplacedinasterilePetridishfortheinitialstepsofprocessing.
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TissueDispersion
Thetissuesampleisthencutintoveryfinepiecestoprepareitforculturinginvitro.Thisdispersionofthetissueincreasesthenumberoftissuesurfacesfromwhichnewcellscangrow.????????????????????;Incubation
Thedispersedtissueisplacedinatissuecultureflaskwithnutrientstopromoteandsupportnewcellgrowth.Duringtheentirephaseofnewcellgrowththetissueflasksarekept