生物组织中还原糖、脂肪、蛋白质的鉴定
实验用品
1、仪器/器具:显微镜,水浴锅,电子天平,载玻片,盖玻片,试管,试管夹,试管架,双面刀片,镊子,滴管,研钵,研杵,吸水纸。
2、材料:苹果、花生种子、鸡蛋,马铃薯。
3、试剂:斐林试剂(甲液:0.1g/mL的NaOH溶液+乙液:0.05g/mL的CuSO4溶液)、苏丹Ⅲ染液、双缩脲试剂(A液:0.1g/mL的NaOH溶液+B液:0.01g/mL的CuSO4溶液)、碘液、体积分数为50%的酒精溶液、蒸馏水。
一、还原糖的鉴定
1.将苹果去皮、切块,取5g放入研钵,加5mL水研磨,用单层纱布进行过滤。
2.取样液2mL加入试管中;
3.向试管中加入2mL新制的斐林试剂,震荡摇匀,观察溶液颜色;
4.将试管放在水浴锅中(50~65°C)加热约2分钟,观察溶液颜色的变化。
二、脂肪的鉴定
1.切片:花生种子浸泡、去皮、将子叶切成薄片,取最薄的薄片,放在载玻片中央;
2.染色:在子叶薄片上滴2~3滴苏丹III染液,染色3分钟,用吸水纸吸去周围染液;
3.去浮色:加1~2滴体积分数为50%的酒精溶液洗去浮色,再用吸水纸吸去多余的酒精溶液;
4.制成临时装片:在薄片上滴1~2滴蒸馏水,盖上盖玻片;
5.观察:低倍镜下寻找已着色颗粒,移至视野中心,换用高倍镜观察,观察被染色的脂肪组织颜色变化。
三、蛋白质的鉴定
1.将新鲜鸡蛋用镊子轻轻敲碎蛋壳,用滴管吸取0.5mL蛋清加入到试管中,取5mL蒸馏水将蛋清稀释,用滴管吹打均匀;
2.取2mL蛋清稀释液于试管中,向试管中加入双缩脲试剂A液1mL,摇匀;接着向试管中滴加B液3~4滴,摇匀,观察试管中颜色变化情况。
注意:先加A液再加B液。
实验结果和原理
还原糖+斐林试剂→砖红色沉淀
脂肪+苏丹Ⅲ→橘黄色or脂肪+苏丹Ⅳ→红色
蛋白质+双缩脲试剂→紫色
因此,可以根据与某些化学试剂所产生的颜色反应,检测生物组织中糖类、脂肪或蛋白质的存在。
头脑风暴
1、哪种试剂使用时现用现配?
斐林试剂
2、脂肪鉴定实验中用什么洗去浮色?
50%酒精
3、在蛋白质的鉴定中为什么要先加A液?
营造碱性环境
4、哪一种试剂检测蛋白质?
双缩脲试剂