II流式细胞仪的基本结构（４）细胞信号的分析散射光信号分析荧光信号分析散射光/荧光信号分析*第62页，共90页，星期日，2025年，2月5日II流式细胞仪的基本结构（４）散射光分析散射光（FSC、SSC）可用直方图、二维点图、假三维图、三维图等分析A--白细胞FSC直方图。B--白细胞SSC直方图。C--白细胞FSC/SSC二维图：可分辨L、M、粒细胞。D--红细胞/血小板FSC直方图。E--红细胞/血小板SSC直方图。F--红细胞/血小板FSC/SSC二维点图。*第63页，共90页，星期日，2025年，2月5日II流式细胞仪的基本结构（４）荧光分析荧光（FL1、FL2、FL3）可用直方图、二维点图等分析。A--CD8直方图。B--CD3/SSC二维点图：设门，R1为CD3+T淋巴细胞。C--R1中CD3+T淋巴细胞CD4/CD8二维图。D--FSC/SSC二维点图：设门，R2淋巴细胞分布区。E--R2中淋巴细胞CD3/CD4二维点图。F--R2中淋巴细胞CD3/CD8二维图。*第64页，共90页，星期日，2025年，2月5日II流式细胞仪的基本结构（５）细胞分选器：由水滴形成、分选逻辑电路、水滴充电及偏转这三部分组成。通过给压电晶体的振动使自喷嘴喷出的流束形成水滴，分选逻辑电路根据分选细胞的参数，给含有此参数的细胞液滴充电，充电的液滴经过电极偏转板时，依所带电荷的不同而偏向不同的电极板，在电极的下方放置收集容器，即可得到分选的细胞。*第65页，共90页，星期日，2025年，2月5日III流式细胞仪的性能指标荧光分辨率：表示仪器测量所能达到的最大精度，通常用变异系数表示。目前，仪器的荧光分辨率都在2%以下。荧光灵敏度：表示仪器所能检测到的最少荧光量，通常用能检测到的最少的异硫氰酸荧光素（FITC）分子来表示。一般仪器的荧光灵敏度为3000个FITC分子。前向角散射光灵敏度：以前向角散射光能检测到的最小颗粒直径表示。一般仪器可检测到的最小颗粒直径在0.3um左右。*第66页，共90页，星期日，2025年，2月5日III流式细胞仪的性能指标前向角散射光分辨率：用变异系数表示。一般约在2%，但多数厂家不给出此值。分析/分选速度：分析速度可达每秒5000~10000个细胞，分选速度为每秒5000个细胞通过测量去。实用时为保证分析或分选精度，常在每秒1000个以下。分选纯度：分选纯度不但与仪器精度有关，还与被分选的细胞亚群在整个群体中的相对位置有关。若被分选的亚群在直方图或二维点图上可清晰地分辨出来且与其他亚群无重叠，分选纯度就高，反之就低。*第67页，共90页，星期日，2025年，2月5日III流式细胞仪的性能指标分选收获率：是指通过测量区应被分选的细胞中实际落到指定收集器中的细胞数目所占的百分比。一般仪器在90%以上。分选收获率和分选纯度是相互制约的，纯度低，收获率就高，纯度高，收获率就低。除了以上7个参数外，还有其他指标，如样品浓度、同时可测参数、光源、喷孔尺寸、计算机配置等。*第68页，共90页，星期日，2025年，2月5日IV流式细胞仪的使用流式细胞仪的安装流式细胞仪的调校流式细胞仪的测试方法流式细胞仪的维护流式细胞仪的常见故障及排除*第69页，共90页，星期日，2025年，2月5日IV流式细胞仪的使用流式细胞仪的测试方法：一般包括5个步骤。①制备合格的单细胞悬液。在FCM技术中，制备出合格的单个细胞悬液是最为关键的一个环节。②对需测量的细胞生物化学成分进行荧光标记染色。③进行流式细胞仪测量。④对测量资料进行定量分析。⑤对测量分析结果在生物学上的意义予以解释。*第70页，共90页，星期日，2025年，2月5日V流式细胞仪的应用流式细胞技术在细胞生物学中的应用流式细胞技术在免疫学中的应用流式细胞技术在肿瘤学中的应用流式细胞技术在血液学中的应用*第71页，共90页，星期日，2025年，2月5日V流式细胞仪的应用流式细胞仪在临床血液学中的应用白血病：血细胞形态学检查是白血病诊断的基础，白血病免疫学分型是对形态学分型的重要补充和进一步深化。白血病MICM分型认为免疫学分型对每一例急性白血病诊断都是必不可少的，对下列情况意义更大：①用形态学、细胞化学染色不能肯定细胞来源的白血病。