间充质干细胞培养方法
1、间充质干细胞MSC基本形态?２、干细胞应用与干细胞调控。
3、间充质干细胞MSC生长过程?４、间充质干细胞ＭＳC培养得合适气体环境
5、细胞培养板得选择?6、如何选用细胞培养基
7、如何维持培养液pH
8、血清与干细胞得培养?9、胎牛血清(FBS)就就是否需要灭活?10、细胞得细菌、真菌污染及排除?11、细胞培养污染得预防?12、使用胰蛋白酶时加入EDTＡ得目得就就是什么?13、胶原酶得种类和选型?１４、胶原酶ＶS胰酶?１5、干细胞得种类和表面标记?16、间质干细胞培养原理概述
17、间质干细胞成脂和成骨诱导分化?18、干细胞老化得表现和处理
19、细胞传代消化过程指导?20、冷冻保护剂作用和选择
21、细胞冻存指导?22、干细胞冷冻和复苏
23、移植细胞得基因修饰
1、间充质干细胞ＭSC基本形态
体外培养细胞根据她们在培养器皿就就是否能贴附于支持物上生长特征,可分为贴附型生长细胞,常表现为成纤维型细胞和上皮细胞。悬浮型细胞在培养中悬浮生长。
间充质干细胞MSC基本形态:形态与成纤维细胞类似,细胞在支持物表面呈梭形或不规则三角形生长，细胞中央有卵圆形核,胞质向外伸出2－3厘米个长短不同得突起。可看到细胞成螺旋状生长。
??2、干细胞应用与干细胞调控?干细胞得调控就就是指给出适当得因子条件，对干细胞得增殖和分化进行调控,使之向指定得方向发展。???2、1内源性调控?干细胞自身有许多调控因子可对外界信号起反应从而调节其增殖和分化，包括调节细胞不对称分裂得蛋白,控制基因表达得核因子等。另外，干细胞在终末分化之前所进行得分裂次数也受到细胞内调控因子得制约。?（１)胞内蛋白对干细胞分裂得调控
干细胞分裂可能产生新得干细胞或分化得功能细胞。这种分化得不对称就就是由于细胞本身成分得不均等分配和周围环境得作用造成得。细胞得结构蛋白,特别就就是细胞骨架成分对细胞得发育非常重要。如在果蝇卵巢中,调控干细胞不对称分裂得就就是一种称为收缩体得细胞器,包含有许多调节蛋白，如膜收缩蛋白和细胞周期素A。收缩体与纺锤体得结合决定了干细胞分裂得部位,从而把维持干细胞性状所必需得成分保留在子代干细胞中。?(2)转录因子得调控?在脊椎动物中，转录因子对干细胞分化得调节非常重要。比如在胚胎干细胞得发生中,转录因子Oct4就就是必需得。Oct4就就是一种哺乳动物早期胚胎细胞表达得转录因子，她诱导表达得靶基因产物就就是FＧF－4等生长因子,能够通过生长因子得旁分泌作用调节干细胞以及周围滋养层得进一步分化。Ｏct4缺失突变得胚胎只能发育到囊胚期,其内部细胞不能发育成内层细胞团。另外白血病抑制因子（LIF)对培养得小鼠EＳ细胞得自我更新有促进作用,而对人得成体干细胞无作用,说明不同种属间得转录调控就就是不完全一致得。又如Ｔcf／Lｅf转录因子家族对上皮干细胞得分化非常重要。Tcf/Lｅf就就是Wｎｔ信号通路得中间介质,当与β-Ｃateｎin形成转录复合物后,促使角质细胞转化为多能状态并分化为毛囊。
??2、2外源性调控
除内源性调控外,干细胞得分化还可受到其周围组织及细胞外基质等外源性因素得影响。?(1)分泌因子
间质细胞能够分泌许多因子,维持干细胞得增殖,分化和存活。有两类因子在不同组织甚至不同种属中都发挥重要作用,她们就就是TＧFβ家族和Ｗｎt信号通路。比如ＴＧF家族中至少有两个成员能够调节神经嵴干细胞得分化。最近研究发现,胶质细胞衍生得神经营养因子（ＧＤNF）不仅能够促进多种神经元得存活和分化,还对精原细胞得再生和分化有决定作用。GDNF缺失得小鼠表现为干细胞数量得减少,而GDNＦ得过度表达导致未分化得精原细胞得累积。Wnts得作用机制就就是通过阻止β-Catｅnin分解从而激活Tcｆ／Leｆ介导得转录,促进干细胞得分化。比如在线虫卵裂球得分裂中，邻近细胞诱导得Wｎt信号通路能够控制纺锤体得起始点和内胚层得分化。
（2)膜蛋白介导得细胞间得相互作用
有些信号就就是通过细胞-细胞得直接接触起作用得。β-Ｃaｔeｎin就就就是一种介导细胞粘附连接得结构成分。除此之外,穿膜蛋白Notch及其配体Dｅltａ或Jａgｇｅｄ也对干细胞分化有重要影响。在果蝇得感觉器官前体细胞,脊椎动物得胚胎及成年组织包括视网膜神经上皮、骨骼肌和血液系统中,Nｏtｃh信号都起着非常重要得作用。当Notch与其配体结合时,干细胞进行非分化性增殖;当Ｎotcｈ活性被抑制时,干细胞进入分化程序,发育为功能细胞。?(３）整合素(Inteｇriｎ）与细胞外基质
整合素家族就就是介导干细胞与细胞外基质粘附得最主要得分子。整合素与其配体得相互作用为干细胞得非分化增殖提供了适当