第30页，共47页，星期日，2025年，2月5日同一细菌在不同的培养平板上形成不同的特征菌落第31页，共47页，星期日，2025年，2月5日2、显微镜个体观察技术放大倍数分辨率反差能辨别两点之间最小距离的能力被观察物区别于背景的程度一、显微技术：用显微镜进行观察的技术显微镜的自身特点有关也取决于显微观察时对显微镜的正确使用良好的标本制作和观察技术评价显微镜性能的指标第32页，共47页，星期日，2025年，2月5日二、光学显微镜的种类及原理1.普通光学显微镜第33页，共47页，星期日，2025年，2月5日第1页，共47页，星期日，2025年，2月5日目的和要求：本章主要使大家熟练掌握无菌技术、纯种分离技术，并对显微镜的结构、种类、原理和显微观察技术有初步了解重点、难点：（1）微生物学实验操作的最基本的无菌技术（2）掌握微生物的分离、纯化及纯培养技术。（3）熟练使用普通光学显微镜，理解提高光学显微镜分辨率的原理。 第2页，共47页，星期日，2025年，2月5日第一节微生物的分离和纯培养一、无菌技术用于分离、转接、培养微生物的器具事先不含任何微生物；在分离、转接、培养微生物做到无菌操作在分离、转接、纯种培养过程中为保持纯种的“纯洁”性而防止被其它微生物污染的技术。 第3页，共47页，星期日，2025年，2月5日高温干热灭菌高压蒸汽灭菌试管、瓶子、培养皿等常用的灭菌方法：1、微生物培养的常用器具及接种室的灭菌（1）常用的器具：第4页，共47页，星期日，2025年，2月5日紫外线杀菌效率与照射强度和时间的成积成正比化学消毒剂熏蒸灭菌霉菌较多先用5%石碳酸喷洒，再用甲醛熏蒸细菌较多乳酸和甲醛交替熏蒸超净工作台的灭菌 （2）接种室的空气灭菌第5页，共47页，星期日，2025年，2月5日2、接种操作无菌操作：培养基经过高压蒸汽灭菌后，用无菌工具在无菌条件下将含菌材料移接于培养基的这一过程。火焰附近（酒精灯、煤气灯）进行第6页，共47页，星期日，2025年，2月5日无菌操作：在无菌箱或操作室内无菌的环境下进行第7页，共47页，星期日，2025年，2月5日微生物的纯种分离：从多种混杂的微生物中，经某种技术或方法获得单一菌株的过程。微生物的纯培养物（pureculture)：一株菌种或一个培养物中的所有细胞或孢子都是由一个细胞分裂、繁殖而产生的后代 二、微生物的分离纯培养技术第8页，共47页，星期日，2025年，2月5日纯种分离的原理和方法第9页，共47页，星期日，2025年，2月5日1.用固体培养基分离纯培养法原理：使微生物稀释后在固体培养基平板上形成单个菌落方法：稀释倒平板法涂布平板法平板划线法厌氧微生物的固体平板分离法 第10页，共47页，星期日，2025年，2月5日1、稀释倒平板法2、涂布平板法对好氧菌、热敏感菌效果不好！使用较多的常规方法，但有时涂布不均匀！第11页，共47页，星期日，2025年，2月5日第12页，共47页，星期日，2025年，2月5日3、平板划线法方法：平行划线法之字形划线法 第13页，共47页，星期日，2025年，2月5日第14页，共47页，星期日，2025年，2月5日4、厌氧微生物的分离厌氧罐厌氧手套箱对严格厌氧微生物的培养采用稀释摇管法进行分离第15页，共47页，星期日，2025年，2月5日个别细胞较大细菌固体平板不能长菌落原生动物、藻类接种物用液体培养基顺序梯度稀释法分离: 2、用液体培养基分离纯培养 第16页，共47页，星期日，2025年，2月5日培养物在液体培养基中进行顺序梯度稀释，使每一稀释度都含有很多平行试管，如果同一个稀释度的大多数（一般应超过95%）平行试管中没有微生物生长，有微生物生长的试管得到的培养物可能就是纯培养物。 第17页，共47页，星期日，2025年，2月5日3、单细胞（孢子）分离法一般采用显微操作仪，在显微镜下进行；操作难度与细胞或个体的大小成反比；解剖显微镜下用吸管挑选单细胞（孢子） 第18页，共47页，星期日，2025年，2月5日4、选择培养分离法抑制大多数其它非目的微生物；使待分离的目的微生物成为优势菌；原理：创造适于目的微生物生长条件；第19页，共47页，星期日，2025年，2月5日方法：1、利用选择培养基直接分