扫描隧道显微镜图片硅表面纳米算盘由单个原子构成的“IBM”第31页，共54页，星期日，2025年，2月5日（二）电子显微术电镜具有很高的分辨本领，能观察极微小的结构。但是电镜不能直接观察天然状态下的生物标本，必须通过各种技术将生物标本制成特殊的电镜生物样品，才能放入电镜进行观察，这些电镜样品制备技术称为电子显微术。电子显微术：将标本制成特殊的电镜观察用样品的制备技术。第32页，共54页，星期日，2025年，2月5日1．与TEM有关的电子显微术（1）超薄切片技术。超薄切片技术就是通过固定、脱水、包埋、切片和染色等步骤，将生物标本切成薄于0.1μm的超薄切片的样品制备技术，用于生物组织的内部超微结构研究。第33页，共54页，星期日，2025年，2月5日上图超薄切片机局部下图玻璃刀制作仪第34页，共54页，星期日，2025年，2月5日（2）负染色技术。利用电子密度比标本高的重金属盐（如磷钨酸钠、醋酸铀等）将生物标本包围起来，增强背景散射电子的能力以提高反差，在黑暗的背景下显示标本的形态结构，称负染色技术。这一技术操作简便，主要用于颗粒状标本（如细菌、病毒、分离细胞器等）的研究。（3）冷冻蚀刻技术。在快速冷冻下对生物样品进行断裂、蚀刻和复型，制备生物样品复型膜的技术称冷冻蚀刻技术。在电镜下观察复型膜可获得立体感强的超微结构图像，主要用于生物膜结构的研究。第35页，共54页，星期日，2025年，2月5日（4）电镜细胞化学技术。在超微结构水平上，通过电镜细胞化学反应来研究细胞成分的分布和变化的方法称电镜细胞化学技术。这一技术把细胞超微结构与其化学组成有机地结合起来，目前主要用于研究细胞内各种大分子物质和酶的定位等。（5）免疫电镜技术。这是一种使抗原在超微结构水平上定位的技术，应用与抗原相应的标记抗体，在电镜下观察标记物的位置，从而定位相应抗原。这一技术具有灵敏度高、特异性强的特点。（6）电镜放射自显影技术。这是电镜技术与放射自显影技术相结合，观察放射性物质在超微结构水平上的定位和变化，从而了解细胞的各种代谢活动。这一技术使结构与功能的研究结合起来，是一种动态的研究方法。第36页，共54页，星期日，2025年，2月5日2．与SEM有关的电子显微术（1）SEM常规制样技术。SEM适合于研究生物样品的表面特征，样品制备包括样品观察面的暴露、固定、干燥和导电等步骤，使表面特征充分暴露而不变形。这一技术是SEM样品制备的常规技术，主要用于组织、细胞、寄生虫等表面形貌的研究。下图为SEM标本处理设备。第37页，共54页，星期日，2025年，2月5日大鼠睾丸精子细胞左上青年对照左下老年对照右上二仙汤组右中温肾组右下泻火组第38页，共54页，星期日，2025年，2月5日显微测试技术第1页，共54页，星期日，2025年，2月5日一、显微镜发展历史1665年1665年,英国科学家胡克用自己设计与制造的的简易显微镜观察栎树软木塞切片时，发现其中有许多小室，他把这些小室称为细胞，实际上胡克当时看到的是细胞壁。这是人类发现细胞的第一步。第2页，共54页，星期日，2025年，2月5日普通光学显微镜的构造目镜粗准焦螺旋镜筒细准焦螺旋转换器物镜镜臂聚光器反光镜镜座第3页，共54页，星期日，2025年，2月5日列文虎克观察到的“小动物”第4页，共54页，星期日，2025年，2月5日2、显微镜的分辨力分辨力是指显微镜（或人的眼睛距目标25cm处）能分辨物体最小间隔的能力，分辨力的大小决定于光的波长和镜口率以及介质的折射率，用公式表示为：R=0.61λ/N．A．N．A．＝ｎsinα/2式中：n=介质折射率；α=镜口角（标本对物镜镜口的张角），N.A.=镜口率（numericaperture）。镜口角总是要小于180?，所以sina/2的最大值必然小于1。第5页，共54页，星期日，2025年，2月5日光学显微镜的原理1、在观察样品时，被观察的物像通过物镜到达目镜，物像被两次放大。所以放大倍数=物镜的放大倍数×目镜的放大倍数2、由于可见光的波长在380~760nm范围内，因此，最精确的光学显微镜的放大倍数也只有1500倍。第6页，共54页，星期日，2025年，2月5日电子显微镜下的蚊子最早的电子显微镜高电压下电子流波长很短（100000×）卢斯卡（ErnstRuska）20C30s1952年