固相析出技术
一盐析沉淀法二有机溶剂沉淀三等电点沉淀法固相析出技术2
1原理2用盐选择3盐析的影响因素4盐析操作盐析沉淀法3
原理1原理在高浓度中性盐存在的情况下，蛋白质(或酶)等生物大分子在水溶液中的溶解度降低并沉淀析出的现象称为盐析。不同的蛋白质盐析时所需的盐的浓度不同，因此调节盐的浓度，可以使混合蛋白质溶液中的蛋白质分段析出，达到分离纯化的目的。4
用盐选择2用盐选择通常采用中性盐，最常用（NH4）2SO4，优点：1、溶解度大：尤其是在低温时仍有相当高的溶解度，这是其他盐类所不具备的。由于酶和各种蛋白质通常是在低温下稳定，因而盐析操作也要求在低温下（0～4℃）进行。硫铵在0℃时的溶解度70.6g/100mL，Na2SO4-4.9,?NaH2PO4-1.62、不易引起变性，有稳定酶与蛋白质结构的作用。有的酶或蛋白质用2～3mol/L浓度的（NH4）2SO4保存可达数年之久。3、次常用Na2SO4。缺点：在30℃以下溶解度较低，主要用于热稳定蛋白。5
3盐析的影响因素蛋白质的浓度适中的蛋白质浓度是2.5％～3.0％pH值对盐析的影响等电点温度的影响室温0℃～4℃盐析的影响因素6
盐析操作注意事项4盐析操作注意事项盐的处理硫酸铵用化学法将重金属除去（如通入H2S后过滤），再将硫酸铵重结晶备用。加盐固体硫酸铵加入法（需要量大时）加入饱和硫酸铵溶液法（需要量小时）7
1原理2用盐选择3盐析的影响因素4盐析操作有机溶剂沉淀法8
原理1原理向水溶液中加入一定量亲水性的有机溶剂，降低溶质的溶解度，使其沉淀析出的分离纯化方法（1）静电作用：降低水溶液的介电常数（2）脱水作用：有机溶剂与水互溶，它们在溶解于水的同时从蛋白质分子周围的水化层中夺走了水分子，破坏了蛋白质分子的水膜，因而发生沉淀作用9
影响因素2影响有机溶剂沉析的因素温度冰盐浴缓慢且不断搅拌样品浓度蛋白质的初浓度以0.5～2%（5~20mg/mL）为好，多糖则以1～2％起始较合适。pH值等电点附近离子强度低浓度缓冲液中沉淀蛋白质10
3有机溶剂沉淀法的应用优点：分辨能力比盐析高,即一种生物分子或其他溶质只在一个比较窄的有机溶剂浓度范围内沉析；沉析不用脱盐，过滤比较容易。缺点：是某些具有生物活性的大分子容易引起变性失活，操作需在低温下进行。应用：蛋白质、酶，多糖和核酸等生物大分子应用11
原理等电点沉淀法12
原理1原理原理：调节两性生化物质溶液的pH值，以达到某一生化物质的等电点，使其从溶液中沉淀析出而实现分离的技术称为等电点沉析技术特点：操作十分简单，试剂消耗少，常与盐析法、有机溶剂沉淀法或其他沉淀剂一起配合使用13