回第五节一电泳的类型按其支持物的物理性状不同可分为：滤纸及纤维电泳：如玻璃纤维、醋酸纤维、聚氯乙烯纤维薄膜。凝胶电泳：如琼脂、聚丙烯酰胺凝胶、淀粉凝胶电泳。粉末电泳：如纤维素粉、淀粉、玻璃粉电泳。按支持物的装置形式不同，区带电泳可分为；平板式电泳：支持物水平放置，是最常用的电泳方式。垂直板式电泳：如聚丙烯酰胺凝胶可做成垂直板式电泳垂直柱式电泳：如聚丙烯酰胺凝胶盘状电泳。*第158页，共181页，星期日，2025年，2月5日二、聚丙烯酰胶凝胶电泳（一）盘状电泳（二）SDS－PAG电泳（三）凝胶等电聚焦（四）双向电泳回第五节分类*第159页，共181页，星期日，2025年，2月5日用PAG电泳分离的大分子的检测1．考马斯亮蓝染色法2．银染色法3．荧光染色技术4．酶活性染色法5．同位素检测法6．用荧光标记的抗体检测回上页*第160页，共181页，星期日，2025年，2月5日考马斯亮蓝染色法灵敏度高，检出极限为0.3～lug用磺基水杨酸将蛋白质固定在PAG上用0.25％考马斯亮蓝染料液染色2～4／小时过量染料用7％醋酸洗涤除去脱色液由冰醋酸、甲醇和水组成，反复洗涤即可脱色凝胶可保存在7％醋酸中。回上一级*第161页，共181页，星期日，2025年，2月5日银染色法利用银离子与蛋白质以盐或配位络合盐的形式结合，后由甲醛将银离子还原成可见的银颗粒可检测ng级的蛋白质操作简便、快速、不需特殊设备和试剂，可与同位素放射自显影相媲美回上一级*第162页，共181页，星期日，2025年，2月5日荧光染色技术用于PAG上蛋白的检测，灵敏快速。苯胺基萘磺酸镁（ANS）在水中不发荧光，在有机溶剂中或结合到蛋白的疏水表面，会发出强烈荧光。蛋白质变性后再染色，检出极限ng级。回上一级*第163页，共181页，星期日，2025年，2月5日酶活性染色法利用酶的催化专一性反应进行染色，分①酶的底物或产物有荧光，反应后，可检测荧光的消失和出现。②酶催化产生颜色很深的不溶性产物，能指示该酶在凝胶上的位置。回上一级*第164页，共181页，星期日，2025年，2月5日同位素检测法具有放射性的配体与凝胶上的蛋白质专一结合后，可用放射自显影法检测结合的配体。回上一级*第165页，共181页，星期日，2025年，2月5日用荧光标记的抗体检测用荧光素标记抗体，抗体进入凝胶后与待检蛋白结合，洗去未结合的抗体后，经紫外光照射，即可检出荧光的位置。回上一级*第166页，共181页，星期日，2025年，2月5日◆包括有免疫电泳、火箭免疫电泳、交叉免疫电泳、薄层凝胶过滤免疫电泳、电聚焦交叉免疫电泳、火箭线形免疫电泳、交叉线形免疫电泳等。1953年由Grabar及Williams两人发明，后来改成一种微量测定法三、凝胶免疫电泳用琼脂糖作介质的电泳分离和专一性免疫沉淀反应相结合的检测方法称为凝胶免疫电泳（gelimmunoelectrophoresis）。回第五节*第167页，共181页，星期日，2025年，2月5日火箭免疫电泳抗体预先混入凝胶中，选择适当的pH使抗体分子不泳动。抗原泳向阳极，在抗原抗体比例恰当处发生结合沉淀。随着泳动抗原的减少，沉淀逐渐减少，形成峰状的沉淀区，状似火箭。抗体浓度保持不变，峰的高度与抗原量呈正比。*第168页，共181页，星期日，2025年，2月5日一般情况下，抗原检出灵敏度在0.3mg／L左右。火箭电泳示意图*第169页，共181页，星期日，2025年，2月5日四、高效毛细管电泳回第五节*第170页，共181页，星期日，2025年，2月5日毛细管电泳?1?离子移动的速率?=?eE=?eU/LU是毛细管柱两端施加的电压?L是毛细管柱总长。采用高电压可以达到使离子迅速移动和快速分离。?2?毛细管电泳中的塔板数较高由于分离度随塔板数的增加而增加，因此为了获得高的分离度应采用高电压。在凝胶板电泳中，一般最高使用的电压约为500V。在毛细管电泳中，一般可采用20,000~60,000V的高电压。毛细管电泳的基本原理*第171页，共181页，星期日，2025年，2月5日?3?洗脱在典型的毛细管电泳分离中，离子的洗脱顺序是:首先是最快的阳离子，紧接着是依次减慢的阳离子，然后是全部的中性分子在一个区域出现，最后是最慢的阴离子，紧接着的是依次加快的阴离子。*第172页，共181页，星期日，2025年，2月5日毛细管电泳装置一般在一根