基线噪声（规则的）可能原因1、流动相、泵、检测器中有气泡2、有地方漏液3、流动相混和不均匀4、温度影响（检测器和柱温差别太大）5、其他电子设备的影响基线问题第31页，共72页，星期日，2025年，2月5日基线噪声（不规则的）可能原因1、流动相污染、变质或由低质溶剂配成2、有地方漏液3、流动相各溶剂不相溶或混和不均匀4、流通池污染5、检测池能量不足6、系统内有气泡基线问题第32页，共72页，星期日，2025年，2月5日色谱峰分裂柱外死体积柱头填料污染部分阻塞进样阀密封问题化合物一起洗脱第33页，共72页，星期日，2025年，2月5日色谱峰展宽所有的色谱峰展宽柱效降低进样体积太大部分色谱峰展宽上次进样洗脱的色谱峰蛋白或聚合物等高分子量化合物第34页，共72页，星期日，2025年，2月5日色谱峰拖尾部分色谱峰拖尾次级保留效应–残留硅醇基的作用在大峰的尾部有小峰所有色谱峰拖尾柱外效应柱头污染重金属离子色谱柱填充不理想第35页，共72页，星期日，2025年，2月5日前伸峰色谱柱没有充分平衡在主峰前有小色谱峰第36页，共72页，星期日，2025年，2月5日负峰检测器输出信号的极性相反样品的吸收小于流动相，流动相不纯样品溶剂干扰示差折光检测器中样品的折射率较低进样中带入气泡第37页，共72页，星期日，2025年，2月5日可能原因1、样品过载2、样品溶剂选择不当变形峰第38页，共72页，星期日，2025年，2月5日鬼峰1、进样阀残余峰2、样品中未知物3、柱未平衡4、水污染5、三氟乙酸氧化第39页，共72页，星期日，2025年，2月5日液相色谱实用技术（二）色谱柱的使用及保养第40页，共72页，星期日，2025年，2月5日1.柱头螺丝2.过滤筛板3.色谱柱管刃环4.柱头压帽5.色谱柱柱管色谱柱结构第41页，共72页，星期日，2025年，2月5日?3微米多孔二氧化硅微球第42页，共72页，星期日，2025年，2月5日固定相基质类型第43页，共72页，星期日，2025年，2月5日Si-O-HSi-O-HSi-O-HSi-O-HSi-O-H硅胶颗粒表面硅羟基键合相Si-O-HSi-O-SiSi-O-Si-O-SiSi-O-Si液相色谱固定相第44页，共72页，星期日，2025年，2月5日烷基键合固定相表面第45页，共72页，星期日，2025年，2月5日良好的色谱实验习惯拿到一根新色谱柱时，先仔细阅读说明书测定柱效（说明书+实际条件）保留在新色谱柱上测得的色谱图，并记录条件定期检测柱效定期检测仪器的谱带展宽第46页，共72页，星期日，2025年，2月5日色谱柱的使用及操作流动相的转换流速（压力）的变化幅度温度的变化幅度专用色谱柱∶样品及溶剂的要求第47页，共72页，星期日，2025年，2月5日色谱柱的保养（一）样品方面除去微粒及杂质了解样品在流动相中的溶解度如样品的溶剂不是流动相，一定要用流动相试溶解度，防止其在流动相中析出了解样品与色谱柱的基质/填料是否相互作用第48页，共72页，星期日，2025年，2月5日色谱柱的保养（二）流动相方面除去微粒纯度的要求超纯水，梯度实验时水中有机杂质含量要低缓冲液的pH值，在填料的允许范围内缓冲液（盐）的浓度溶剂：色谱纯，并与填料相匹配溶剂中的杂质含量流动相对样品的溶解度有机溶剂或水的比例第49页，共72页，星期日，2025年，2月5日在线的保护装置给色谱柱提供物理的保护除去样品及流动相中的颗粒给色谱柱提供化学的保护防止分析柱被化学污染装置在线过滤器自装填料保护柱预装保护柱第50页，共72页，星期日，2025年，2月5日在线过滤器In-LineFilter，部件号WAT084560防止颗粒在色谱柱头累积优点：基本不影响柱效在需要高柱效的分析时中常用（如：氨基酸分析）在色谱柱类型特殊时使用可更换的消耗品更换滤芯，部件号WAT005139(5/pkgs)更换垫圈，部件号WAT084567(10/pkgs)第51页，共72页，星期日，2025年，2月5日保护柱可避免化学污染。多数保护柱影响到整个色谱柱的柱效，特别是在用微柱时保护柱的种类普通自装填料的保护柱Waters的部