任务2粮食中黄曲霉毒素B1的快速检测
1.了解黄曲霉毒素的产生及危害
2.了解黄曲霉毒素测定相关标准
3.掌握快速检测仪器测定黄曲霉毒素
一、实验目的
二、实验原理
试样提取液中黄曲霉毒素B1与检测条中胶体金微粒发生呈色反应，颜色深浅与试样中黄曲霉毒素B1含量相关，黄曲霉毒素B1含量越高，检测线颜色越浅。用读数仪测定检测条上检测线和质控线颜色深浅，根据颜色深浅和读数仪内置曲线自动计算出试样中黄曲霉毒素B1的含量。这个方法适用于真菌毒素快速定量检测系统胶体金快速定量法检测，检出限为2μg/kg。执行标准：LS/T6111-2015《粮油检验粮食中黄曲霉毒素B1测定胶体金快速定量法》。
任务2粮食中黄曲霉毒素的快速测定
三、实验器材
（1）试剂：AFB1胶体金快速定量检测条：需2-8°C冷藏保存；AFB1胶体金快速定量检测稀释液；需2-8°C冷藏保存。
（2）仪器：天平，分度值0.01g；粉碎机，可使试样粉碎后全部通过20目筛；离心机；涡旋振荡器；孵育器，可进行40°C恒温（温控精度±1°C）孵育，具有时间调整功能；读数仪：可测定并显示胶体金定量
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四、实验步骤
1、检测仪准备
打开全封闭式孵育器，调节温度至40℃，并保持恒温。打开胶体金读数仪，预热5min。点击曲线管理，取曲线二维码，靠近仪器指示位置，成功读取曲线后点击返回，然后点击单机定量，依次点击并选择产品名称、批次号、检测样本等内容。
任务2粮食中黄曲霉毒素的快速测定
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2、试样制备
称取5g(误差≤0.02g)样品，转移到做好标记的50mL离心管中。移取20ml50%乙醇水加入到盛有样品的离心管中，在迷你振荡器上充分震荡1min。取两个2ml离心管,做好标记，将震荡后的液体转移到对应的2mL离心管中，4000rpm离心3min。取7ml离心管做好标记，用100-1000uL移液器取1000uL摇匀的样品稀释液至7mL离心管中，用20-200uL移液器取50uL离心后得到的上清液加入到盛有稀释液的离心管中，枪头插到页面下约2-3mm处，轻轻吸打约3-5次，盖紧离心管盖，使用迷你振荡器充分振荡混匀后，放在离心管架上，待检。
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3、样品的测定
取出所需数量的试纸条，做好标记，并将所需数量的微孔试剂放在40℃全封闭式孵育器上。用20-200μL移液器取200μL待检液于微孔试剂中，采用半枪吸打方式，吸打约6-8次并伴随搅拌，使微孔试剂充分溶解，并防止产生气泡。紧闭孵育器上盖，按下计时器，孵育3min。将试纸条印有Logo的手柄端向上，另一端向下并充分浸入到微孔溶液中，紧闭孵育器上盖，按下计时器，40℃条件下反应5min。去掉试纸条下端的样品垫，装入专用试纸条卡槽，保证两条色带在卡壳视窗中间，注意不要触碰或损坏试纸条中部的检测区域。将样品卡壳视窗面向上，插入读数仪中，按下“TEST”按钮或点击屏幕”检测“键，读取结果，如需打印，点击“打印”键即可。检测结果应在反应结束后1min内读取。
任务2粮食中黄曲霉毒素的快速测定
3、样品的测定
若检测结果超出曲线范围上限，需要再次检测时，可取离心后得到的上清液，用纯水对倍稀释，再按后续步骤进行稀释、检测。
再次检测时，检测结果需乘以稀释倍数2。
任务2粮食中黄曲霉毒素的快速测定
胶体金定量产品使用流程图
任务2粮食中黄曲霉毒素的快速测定
结果判读-胶体金试纸条
定量-仪器判读
五、实验结果
根据读数仪显示结果进行判读。
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六、注意事项
储存温度：按厂家要求存储。
反应温度：按说明书要求，样品和检测卡或者试纸条都需要回温，反应时最好有温控设备（如加热器或恒温培养箱），温度过低会出现不出线或者爬不动情况。
任务2粮食中黄曲霉毒素的快速测定
完全溶解：样品溶液需要将酶标孔内胶体金/荧光微球完全溶解，可使用移液器反复吹打，从孔下部往上看无固体物。
提取力度和时间：要充分。
判读时间：到时间后，1min内判读（胶体金）
未完全溶解完全溶解
胶体金条
六、注意事项