LAMP技术检测肉及肉制品中沙门氏菌江苏食品药品职业技术学院

食品安全突发事件频率高是近年来食品安全问题的一个显著特点，沙门氏菌病是公共卫生学上具有重要意义的人畜共患病之一，其病原沙门氏菌属肠道细菌科，包括那些引起食物中毒，导致胃肠炎、伤寒和副伤寒的细菌。人畜感染后可呈无症状带菌状态，也可表现为有临床症状的致死疾病，它可能加重病态或死亡率，或者降低动物的繁殖生产力。为确保食品安全与食品贸易，需要大力加强食品检验的力度，迫切需要建立快速、灵敏的沙门氏菌的检验方法。

环介导等温扩增叩一别，简称是利用条特殊设计的引物和具有链置换活性的聚合酶，在恒温条件下特异、高效、快速地扩增的新技术该技术以其特异性强、灵敏度高、快速、准确和操作简便等优点在核酸的科学研究、疾病的诊断和转基因食品检测等领域得到了日益广泛的应用。研究针对已报道的沙门氏菌保守的invA基因设计了2对特异性强的引物,对反应体系中的Mg2+浓度、dNTP浓度、甜菜碱浓度、反应温度以及外引物与内引物浓度比进行优化，以确定适宜LAMP反应体系和LAMP扩增程序，其适宜反应体系为：2.5uL10xBstbuffer，4uLdNTPs混合物，FIP、BIP引物各4uL、F3、B3引物各0.5uL，适宜镁离子浓度为2.5mmol/L，1uLBst链置换聚合酶，4uL甜菜碱，模板DNA2uL，双蒸水2uL，总反应体系25uL。63℃保温1h，观察反应结果。

比较了LAMP检测肉及肉制品中沙门氏菌的7种模板制备方法，表明FTA滤膜法可高效从样品中提取沙门氏菌DNA，可有效的消除LAMP反应的抑制因子，灵敏度高、操作简便、耗时短，该方法明显优于其他方法。比较了LAMP方法与PCR方法检测人工污染肉制品的检出限，LAMP方法检测沙门氏菌的检出限为3cfu/uL，而PCR法的检出限为300cfu/uL，LAMP法的检出限比PCR法的检出限低100倍，是高效的检测沙门氏菌的方法。

实际检测了48份样品,同时与PCR及国标检测沙门氏菌的方法做了比较,结果表明国标法检出率为85.4%,检出时间为5d,PCR方法的检出率为89.5%,敏感性为,特异性为100%,符合率为95.8%,检出时间为6h,LAMP方法的检出率为91.6%,敏感性为100%,特异性为70.0%,符合率为93.8%,检出时间为1.5h。本研究成功建立了检测沙门氏菌的新方法,该方法特异性好、敏感性高而且节省时间,为食品中致病菌的检测提供了技术平台,为检测机构推广此技术提供了技术支持。

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