模棱两可结果区分的策略模棱两可结果区分的方法常见及确认等位基因原则（Commonallelesandwelldocumentedalleles，CWD）结合多种方法结果进行综合判断改用其它厂家的试剂增加测序的范围或杂交的探针数采用单链DNA抽提技术采用单链扩增技术采用组特异性测序引物技术克隆转染后形成单链后检测第31页，共46页，星期日，2025年，2月5日CWD原则HLA等位基因定义为三大类常见等位基因（Commonalleles）指那些在参考群体中频率大于0.001的等位基因确认等位基因（Well-documentedalleles）至少在五个独立非亲缘个体中或者三个独立非亲缘个体中并伴有特定的单体型被检测到的等位基因罕见等位基因（Rarealleles)除常见等位基因和确认等位基因以外的所有等位基因它们的频率很低第32页，共46页，星期日，2025年，2月5日CWD原则CWD原则CWD原则分型中将常见等位基因和确认等位基因合并为CWD,当模棱两可的等位基因组合中出现CWD等位基因可能需要进一步区分，而出现罕见等位基因组合，其临床分型中实际意义有限，可予以排除第33页，共46页，星期日，2025年，2月5日白细胞抗原系统检测第1页，共46页，星期日，2025年，2月5日目录第一节HLA血清学检测HLA抗原检测HLA抗体检测第二节HLA细胞学检测第三节HLA分子生物学检测HLA的分子生物学检测方法HLA常见基因分型方法比较HLA分型模棱两可结果的原因及其对策第四节粒细胞抗原抗体检测第2页，共46页，星期日，2025年，2月5日第一节HLA血清学检测第3页，共46页，星期日，2025年，2月5日重点提示HLA抗原检测掌握微量淋巴细胞毒实验的原理及其影响因素HLA抗体检测方法淋巴细胞毒方法流式细胞仪方法ELISA方法Luminex检测技术掌握不同方法的原理及其优缺点第4页，共46页，星期日，2025年，2月5日微量淋巴细胞毒试验HLA抗原的血清学分型方法用一系列已知的抗HLA标准分型血清来检测未知淋巴细胞表面的HLA抗原型别微量淋巴细胞毒实验原理基于抗原抗体反应抗原抗体免疫复合物在补体的作用破坏细胞膜利用染料或其它方法鉴定和区分死活细胞计分法：NIH计分法第5页，共46页，星期日，2025年，2月5日HLA抗血清的来源HLA抗体血清来源同种免疫刺激产生HLA同种抗体HLA抗原免疫刺激动物杂交瘤技术人群存在的天然抗体第6页，共46页，星期日，2025年，2月5日微量淋巴细胞毒试验的影响因素HLA抗血清抗血清来源和抗体种类、抗血清效价、抗血清特性、抗血清质量淋巴细胞淋巴细胞活性、淋巴细胞纯度、淋巴细胞数量、淋巴细胞上抗原表达异常孵育时间和温度补体活性染色和固定时间第7页，共46页，星期日，2025年，2月5日血清学抗原分型方法评价血清学方法抗原分型检测HLA-Ⅰ类和Ⅱ类抗原检测HLA-Ⅰ类抗原相对容易检测HLA-Ⅱ类抗原需要分离和纯化Ｂ淋巴细胞易受多种因素影响其错误率相对较高HLA血清学某一座位上只能检测到一个抗原，而基因分型存在两个不同等位基因，应考虑到无效等位基因第8页，共46页，星期日，2025年，2月5日HLA抗体检测补体依赖的淋巴细胞毒方法（CDC）采用淋巴细胞作为靶细胞抗原易受多种因素影响，检测敏感性最低ELISA方法ELISA方法能检测HLA-I和HLA-II抗体流式细胞术采用淋巴细胞作为靶细胞抗原结合荧光检测技术特点Luminex检测技术结合荧光流式细胞仪和免疫标记技术可区分HLA-I和HLA-II抗体可鉴定抗体的属性和强度第9页，共46页，星期日，2025年，2月5日HLA抗体检测Luminex检测技术以包被抗原的微球磁珠作为靶细胞每种磁珠上包被一种抗原多种磁珠可以在同一体系内反应待测血清与磁珠孵育存在HLA抗体时，形成抗原-抗体复合物加入荧光标记的抗人IgG抗体形成抗原-抗体-荧光标记抗体复合物Luminex仪测定微球磁珠上的荧光值判定HLA抗体的强度和特异性微球磁珠荧光值大小每种磁珠的反应特性第10页，共46页，星期日，2025年，2月5日第二节HLA细胞学检测第11页，共46页，星期日，2025年，2月5日重点提示掌握下列方法的基本原理及其应用混合细胞培养方法（mixedlymphocyteculture，MLC）纯合分型细胞（homozygotetypingcell,HTC）预致敏淋巴细胞试验（prim