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文件名称:电泳技术和常用电泳仪.ppt
文件大小:4.15 MB
总页数:45 页
更新时间:2025-07-10
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文档摘要

第四节毛细管电泳的基本结构和分离模式(四)毛细管等电聚焦电泳不同等电点的分子分别聚集在不同的位置上,不作迁移而彼此分离,这就是等电聚焦分离过程。毛细管的等电聚焦是在毛细管内实现的等电聚焦过程,具有极高的分辨率,通常可以分离等电点差异小于0.01pH单位的两种蛋白质,例如肽类、蛋白质的分离。第30页,共45页,星期日,2025年,2月5日第四节毛细管电泳的基本结构和分离模式(五)毛细管等速电泳毛细管内首先导入具有比被分离各组分高电泳淌度的前导电解质,然后进样,随后再导入比各分离组份低电泳淌度的尾随电解质,在强电场的作用下,各被分离组分在前导电解质与尾随电解质之间的空隙中发生分离。第31页,共45页,星期日,2025年,2月5日第四节毛细管电泳的基本结构和分离模式(六)毛细管电色谱它包含了电泳和色谱两种机制,是在毛细管中填充或在毛细管壁上键合(或涂壁)固定相,从而构成毛细管色谱柱,依靠电渗流推动流动相,携带样品迁移,根据样品分子的质荷比、分子尺寸及分配系数的差别而分离。06-13CEC-加压毛细管电色谱仪第32页,共45页,星期日,2025年,2月5日一、概述generalization)电泳(electrophoresis)是指带电荷的溶质或粒子在电场中向着与其本身所带电荷相反的电极移动的现象。利用电泳现象将多组分物质分离、分析的技术叫做电泳技术(electrophoresistechnique)。可以实现电泳分离技术的仪器称之为电泳仪(electrophoresister)。第2页,共45页,星期日,2025年,2月5日目前,电泳技术已广泛用于蛋白质、多肽、氨基酸、核苷酸、无机离子等成份的分离和鉴定,甚至还用于细胞与病毒的研究。临床常用的电泳分析方法主要有醋酸纤维素薄膜电泳、凝胶电泳、等电聚焦电泳、双向电泳和毛细管电泳等。第3页,共45页,星期日,2025年,2月5日第一节电泳原理第二节常用电泳技术和电泳方法第三节常用电泳设备的基本结构及技术指标第四节毛细管电泳的基本结构和分离模式第五节电泳仪的临床应用第六节电泳技术的质量控制本章目录第4页,共45页,星期日,2025年,2月5日第一节电泳原理一、电泳的基本原理物质分子在正常情况下一般不带电,即所带正负电荷量相等,故不显示带电性。但是在一定的物理作用或化学反应条件下,某些物质分子会成为带电的离子(或粒子),不同的物质,由于其带电性质、颗粒形状和大小不同,因而在一定的电场中它们的移动方向和移动速度也不同,因此可使它们分离。06-01电泳现象和电渗流现象。第5页,共45页,星期日,2025年,2月5日第一节电泳原理若将带净电荷Q的粒子放入电场,则该粒子所受到的电荷引力为:F引=EQ(6-1)在溶液中,运动粒子与溶液之间存在阻力F阻F阻=6πrηV(6-2)当F引=F阻时EQ=6πrηVV=EQ/6πrη(6-3)由上式可以看出,粒子的移动速度(泳动速度V)与电场强度(E)和粒子所带电荷量(Q)成正比,而与粒子的半径(r)及溶液的粘度(η)成反比。第6页,共45页,星期日,2025年,2月5日第一节电泳原理二、影响电泳的外界因素(一)电场强度(二)溶液的pH值(三)溶液的离子强度(四)电渗作用(五)粒子的迁移率(六)吸附作用第7页,共45页,星期日,2025年,2月5日第二节常用电泳技术和电泳方法一、电泳技术的分类(一)根据工作原理的不同:可分为移界电泳、区带电泳、等速电泳、等电聚焦电泳、免疫电泳等。(二)根据有无固体支持物可分为:自由电泳和支持物电泳第8页,共45页,星期日,2025年,2月5日第二节常用电泳技术和电泳方法(三)根据支持载体的位