（三）采样方法（棉拭子法、压印法两种）棉拭子法：用5×5cm的标准灭菌规格版，放在被检物体表面，用浸有含有相应中和剂的无菌洗脱液的棉拭子，在规格板内横竖往返均匀涂抹5次，并随之转动棉拭子，可连续采样1～4个规格板面积。剪去手接触部分，并将棉拭子放入装有10ml含相应中和剂的试管内，立即送检。门把等小型物体则采用棉拭子直接在物体表面按一定顺序涂抹采样，结果计算用cfu／件表示。32第30页，共71页，星期日，2025年，2月5日第31页，共71页，星期日，2025年，2月5日1、步骤（在25cm2规格板内横竖往返均匀涂抹各5次，连续采4个规格板面积）33第32页，共71页，星期日，2025年，2月5日34第33页，共71页，星期日，2025年，2月5日2、检测方法：（1）细菌总数检测：将采样管在混匀器上振荡20s或用力振打80次，用无菌吸管吸取1.0ml待检样品接种于灭菌平皿，每一样本接种2个平皿，内加入已溶化的45～48℃的营养琼脂15～18ml，边倾注边摇匀，待琼脂凝固，置36℃±1℃左右温箱培养48h，计算菌落数。（2）致病菌检测检测原则：致病菌的检测依据污染情况进行相应指标的检测35第34页，共71页，星期日，2025年，2月5日（四）结果判断标准值环境类别范围菌落总数cfu/cm2致病菌＊Ⅰ类≤5不得检出Ⅱ类≤5不得检出Ⅲ类≤10不得检出Ⅳ类≤15不得检出注：＊致病菌指溶血性链球菌、金黄色葡萄球菌。母婴同室、早产儿室、婴儿室、新生儿室及儿科病房的物体表面不得检出沙门氏菌。37洁净手术室和其他洁净场所非洁净手术部（室）、新生儿室、产房、烧伤病房、重症监护病房、血液病病区等儿科病房、母婴同室、妇产科检查室、人流室、输血科、消毒供应中心（室）其他普通住院病区普通门（急）诊、化验室、注射室、换药室、治疗室、感染性疾病科门诊和病区第35页，共71页，星期日，2025年，2月5日四、使用中消毒液染菌量测定（一）采样时间：采取更换前使用中的消毒剂与灭菌器械保存液；（二）采样量及方法：在无菌条件下，用无菌吸管吸取1.0ml被检样液，加入9.0ml含相应中和剂的采样管内混匀；38第36页，共71页，星期日，2025年，2月5日（三）检测方法：1、涂抹法：用无菌吸管吸取1.0ml消毒液，加入9.0ml含相应中和剂的采样管内混匀，用无菌吸管吸取上述溶液0.2ml,滴于干燥普通琼脂平板，每份样品同时做2个平行样，一平行样板置20℃培养7d，观察霉菌生长情况，另一个平板置37℃温箱培养72h，计算菌落数，同时检测致病菌。消毒液染菌量（cfu/ml)=每个平板上的菌落数×5039第37页，共71页，星期日，2025年，2月5日2、倾注法：用无菌吸管吸取1.0ml消毒液，加入9.0ml含相应中和剂的采样管内混匀，分别取0.5ml放入2只灭菌平皿内，加入已溶化的45℃-48℃的营养琼脂15ml-18ml，边倾注边摇匀，待琼脂凝固，一平板置20℃培养7d,观察霉菌生长情况；另一平板置37℃温箱培养72h，计数菌落数，同时检测致病菌。消毒液染菌量（cfu/ml)=每个平板上的菌落数×2040第38页，共71页，星期日，2025年，2月5日（三）结果判断：使用中消毒液染菌量≤100cfu/ml,不得检出致病菌；无菌物品保存液应无菌生长。注意：采样时应无菌操作，正确选用中和剂，采样后1小时内检测。41第39页，共71页，星期日，2025年，2月5日医院需要常备消毒剂的中和剂消毒剂中和剂含氯（碘）消毒剂硫代硫酸钠（0.1%～1.0%)（有效氯或碘0.1%～0.5%)过氧乙酸溶液（0.1%～0.5%）硫代硫酸钠（0.1%～0.5%)过氧化氢溶液（1.0%～3.0%）硫代硫酸钠（0.5%～1.0%)①1%双甲酮与0.6%吗啉的混合液甲醛溶液（1%）②0.1%～0.5%亚硫酸钠③25%氢氧化钠戊二醛溶液（2%）甘氨酸（1%）或甲醛（1%）季按盐类消毒剂Tween80（0.5%～3.0%)+卵磷脂（0.1%～0.5%）（1.0%～2.0%）酚类消毒剂Tween80（0.5%～3.0%)碱类消毒剂等当量酸酸类消毒剂等当量酸酸性氧化电位水硫代硫酸钠（0.5%)+PBS(0.03mol/L)42复方消毒剂Tween80