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文件名称:放射性配体与受体结合分析实验RBA方法.ppt
文件大小:21.47 MB
总页数:64 页
更新时间:2025-07-29
总字数:约6.39千字
文档摘要

2)曲线的高度取决于[RT]。在曲线起始段,曲线上升的快慢即曲线的斜率取决于配基与受体的亲和力,所以,KD越小(亲和力越大),饱和曲线上升越快,KD越大(亲和力越小),饱和曲线上升越慢。(即:亲和力越大,受体与配件结合速度越快,时间越短)k1,v1[R]+[L]----[RL]k2,v2KD=K2/K1=[R][L]/[RL]第30页,共64页,星期日,2025年,2月5日饱和曲线的形状和KD有关(如图1)。图1KD对饱和曲线的影响第31页,共64页,星期日,2025年,2月5日饱和曲线曲线的高度取决于[RT](如图2)。图2[RT]对饱和曲线影响第32页,共64页,星期日,2025年,2月5日质量作用定律(Massactionlaw):受体和配基的结合反应服从可逆反应的质量作用定律,可用下式表示:k1,v1[R]+[L]----[RL](1)k2,v2上式中,[R]和[L]为游离受体和游离配基的浓度,[RL]为复合物浓度,v1和v2为结合速率和解离速率,k1和k2为结合速率常数(associationrateconstant)和解离速率常数(dissociationrateconstant)。数学表达第33页,共64页,星期日,2025年,2月5日根据质量作用定律:v1=k1[R][L];v2=k2[RL]当反应达到平衡后,v1=v2,即:k1[R][L]=k2[RL],则平衡解离常数(KD)的数学表达式为:KD=K2/K1=[R][L]/[RL](2)第34页,共64页,星期日,2025年,2月5日Scatchard作图

设[LT]为配体的初始浓度,[RT]为受体的初始浓度(即受体总量),则有:[L]=[LT]–[RL][R]=[RT]–[RL]由式(2)整理可得:KD=[RT-RL][L][RL]将上式整理可得:[RL]=[RT]-1_×[RL](Scatchard方程)[L]KDKD变形:[RL]为受体与配基特异结合的量,换成[B]表示,[L]为自由配基的量,换成[F]表示,[RT]为受体总量,也即受体最大结合量,换成[Bmax]表示,则上式方程变为 B/F=Bmax/KD-B/KD([RT]为受体总量,等于[R]和[RL]之和,也是最大结合量Bmax)以复合物浓度[RL]为横坐标,以复合物浓度和游离配体的浓度比值[RL]/[L]为纵坐标作图,即为Scatchard作图。第35页,共64页,星期日,2025年,2月5日图3简单单位点系统RBA的Scatchard作图简单单位点系统Scatchard作图为一条直线,斜率为-(1/KD),横轴截距为[RT],纵轴截距为[RT]/KD(见图3)。由此求得KD与Bmax第36页,共64页,星期日,2025年,2月5日Hill方程与作图当一个受体分子可以结合一个以上的配基时,配基受体结合反应不是简单的双分子反应,而是k1,v1[R]+n[L]----n[RL],根据质量作用定律推导出Hill方程:k2,v2经过变形得其中n为hill系数,以结合分数B/Bmax对游离配基[L]作图,得Hill作图(如右)。(3)第37页,共64页,星期日,2025年,2月5日将(3)式两边取对数第38页,共64页,星期日,2025年,2月5日非特异性结合

(non-specificbinding,NSB