*例如：分析阳离子时，以无机酸为流动相，抑制柱为高容量的强碱性阴离子交换树脂，则发生下列反应：R+—OH+HCl(流动相)——R+—Cl-+H2OR+—OH+MCl(待测物)——R+—Cl+M+OH-可见，不仅大量酸转化为低电导的水，而且待测离子转化为具有更大淌度的碱。离子色谱的原理:第31页，共49页，星期日，2025年，2月5日*离子色谱的特点：分析速度快：可在数分钟内完成一个试样的分析；分离能力高：在适宜的条件下，可使常见的各种阴离子混合物分离；分离混合阴离子（NO3—、NO2－、SO42－、PO43－等）惟一快速、灵敏、准确的最有效分析方法。缺点：抑制柱要定期再生、谱峰在经过抑制柱后会展宽，降低分离度。第32页，共49页，星期日，2025年，2月5日四、尺寸排阻色谱法又称凝胶（渗透）色谱，主要用于大分子的分子分离。它是基于待测物分子的尺寸和形状不同来实现分离的。1、分离原理：固定相为化学惰性的多孔凝胶，它类似于分子筛，但孔径更大。凝胶内有一定大小的空穴，分子体积大的待测物不能渗入孔穴中而被排阻，较早地被淋洗出来，中等的部分渗透，小分子则完全渗透，最后流出色谱柱。即待测物分子按分子大小（分子量大小）先后从柱中流出。*第33页，共49页，星期日，2025年，2月5日2.固定相3.流动相的要求：能溶解样品且与凝胶相似（润湿凝胶）、粘度小（增加扩散速度）。*第34页，共49页，星期日，2025年，2月5日第四节色谱分离方法的选择一般可根据试样相对分子质量范围、溶解度及分子结构等进行分离方法的初步选择。一、根据相对分子质量选择二、根据溶解性选择三、根据分子结构选择*第35页，共49页，星期日，2025年，2月5日液相色谱分析*第1页，共49页，星期日，2025年，2月5日第四章高效液相色谱分析第一节概述第二节HPLC仪器第三节高效液相色谱法的类型及分离原理第四节色谱分离方法的选择第五节高效毛细管电泳简介第六节纸层析和薄层层析*第2页，共49页，星期日，2025年，2月5日教学目标及要求1、掌握高效液相色谱法的特点及适用范围，与GC及经典LC的异同。2、掌握高效液相色谱仪的主要部件及基本流程。3、理解常用检测器的原理、适用的分析对象及适用范围。4、理解各种分离方式的原理及选择原则。5、了解高效毛细管电泳基本原理、仪器及特点。6、了解纸层析和薄层层析分离过程、操作技术及特点。*第3页，共49页，星期日，2025年，2月5日第一节概述高效液相色谱（HPLC）是一种以液体为流动相的快速分离分析色谱技术，采用细微粒固定相、高压输液泵和高灵敏度检测器，具有高压、高速、高效、高灵敏度的特点，对于那些沸点高，热稳定性差，相对分子质量大的有机化合物如烷烃、烯烃、芳烃、染料、甾族化合物、蛋白质、氨基酸、核酸等均可进行分离分析。按照固定相不同分为：液液分配色谱；吸附色谱（液固色谱）；离子交换色谱；尺寸排阻色谱（凝胶渗透色谱）；离子色谱、平板色谱（薄层色谱）等。*第4页，共49页，星期日，2025年，2月5日1.高效液相色谱与经典液相色谱方法的比较高压：HPlC供液压力和进样压力都很高（150～350X105Pa）。高压是的一个突出特点。高速：HPLC采用高压输液设备，流速大增加，分析速度极快，只需数分钟；而经典方法靠重力加料，完成一次分析需时数小时。高效：填充物颗粒极细且规则，固定相涂渍均匀、传质阻力小，因而柱效很高。可以在数分钟内完成数百种物质的分离。高灵敏度：检测器灵敏度极高：UV——10-9g,荧光检测器——10-11g。*第5页，共49页，星期日，2025年，2月5日2.HPLC与GC的比较分析对象及范围：GC分析只限于气体和低沸点的稳定有机化合物（占总数的20%）；HPLC可分析高沸点、高分子量的稳定或不稳定有机化合物（占80%）。流动相的选择：GC采用的流动相为几种“惰性”气体，只起运载作用，对组分作用小；HPLC采用的流动相为液体或各种液体的混合（供选择的机会多）。它除了起运载作用外，还可与组分作用，并与固定相对组分的作用产生竞争，即流动相对分离的贡献很大，可通过溶剂来控制和改进分离。操作温度：GC需高温；HPLC通常在室温下进行。*第6页，共49页，星期日，2025年，2月5日3.应用极性增加