第1页，共31页，星期日，2025年，2月5日概述免疫增殖病通常是指以浆细胞、淋巴细胞和巨噬细胞异常增生为特征的疾病，其表现往往有免疫功能异常及免疫球蛋白质和量的变化。与免疫学检验最为密切的是B淋巴细胞异常增殖或其他导致免疫球蛋白异常的免疫球蛋白病，免疫球蛋白病主要表现为高免疫球蛋白血症。第2页，共31页，星期日，2025年，2月5日当临床上考虑为多发性骨髓瘤、巨球蛋白血症或其它浆细胞恶变等免疫球蛋白病时，一般先以血清蛋白区带电泳、免疫球蛋白定量检测或尿本－周蛋白定性作为初筛实验。如果发现有异常球蛋白区带，继而进行免疫固定电泳、免疫球蛋白亚型定量等检测做进一步定量分析和免疫球蛋白分类鉴定。第3页，共31页，星期日，2025年，2月5日实验一
血清免疫固定电泳实验第4页，共31页，星期日，2025年，2月5日实验目的本实验以血清免疫固定电泳实验为例进行实习通过实习，熟悉血清免疫固定电泳的实验过程及注意事项；掌握血清免疫固定电泳检测M蛋白的基本原理与临床意义。第5页，共31页，星期日，2025年，2月5日实验原理将患者血清在琼脂糖凝胶介质上经电泳分离后，将固定剂和各型Ig及其轻链抗血清加于凝胶表面的各自泳道上，经孵育让固定剂和抗血清在各自泳道对应的凝胶内渗透并扩散，若有对应抗原存在，则在适当位置形成抗原抗体复合物并沉淀下来。电泳凝胶在洗脱液中漂洗，去除未结合蛋白质，仅保留贮存在凝胶内的抗原抗体复合物。经染色后蛋白质电泳参考道和抗原抗体沉淀区带被AcideViolet染色液着色。根据电泳移动距离分离出单克隆组分。第6页，共31页，星期日，2025年，2月5日试剂与器材AcideViolet染色液：用1L10%冰醋酸溶解AcideViolet。脱色液：用1L蒸馏水溶解CitricAcidDestain。清洗液：8L蒸馏水溶解Tris-BufferedSaline。电泳仪：spife3000全自动电泳仪。第7页，共31页，星期日，2025年，2月5日Spife3000全自动电泳仪第8页，共31页，星期日，2025年，2月5日操作步骤样本处理：用生理盐水将血清标本适当稀释后备用，其中同一份血清第一泳道样本稀释3倍，第二至第六泳道样本稀释5倍。第9页，共31页，星期日，2025年，2月5日区带电泳上样胶片准备电泳第10页，共31页，星期日，2025年，2月5日沉淀反应加抗血清洗涤、烘干着色第11页，共31页，星期日，2025年，2月5日结果分析对染色烘干后的胶片进行判读。将第一泳道作为血清蛋白分子量参考道，观察第二至第六泳道有无对应的特异性单克隆免疫球蛋白条带。如图12-1所示,其中sp泳道为血清蛋白参考道，由下至上分别为白蛋白、α1球蛋白、α2球蛋白、β球蛋白、γ球蛋白。第2、3、4、5、6泳道分别为IgG、IgA、IgM、κ、λ抗血清泳道。第12页，共31页，星期日，2025年，2月5日第13页，共31页，星期日，2025年，2月5日注意事项标本需取新鲜血清进行分析，为避免抗原过剩引起的带现象，血清于加样前应先作适当稀释并混匀。总免疫球蛋白的水平＞20g/L稀释剂量加倍，当总免疫球蛋白水平＜5g/L稀释剂量减半（除了ELP泳道）。某些样本（尤其是含有冷球蛋白或冷凝胶）冷藏或冰冻后，可能变得粘稠或混浊。这种样本可能由于扩散障碍而存在点样问题。在这样情况下，加25μl液化剂于75μl血清中，混匀15s。然后按规定程序继续进行。第14页，共31页，星期日，2025年，2月5日某些单克隆蛋白质可能因多聚体而导致所有的免疫固定泳道上均出现单克隆片段。在这样情况下可加25μl还原剂（1％β-巯基乙醇）于75μl血清混匀并令其反应至少15min（至多3h)后按规定程序继续进行。在电泳之前，凝胶与电泳槽的贴合面充满电泳介质，并确保两者之间无气泡。第15页，共31页，星期日，2025年，2月5日在抗血清加入血清加样孔后，确保血清与凝胶之间无气泡。染色之前的胶片一定要置于洗涤液中充分洗涤，以出去游离的血清和抗血清成分，降低染色后凝胶的背景色。第16页，共31页，星期日，2025年，2月5日临床应用本法可对各类Ig及其轻链进行分型，最常用于临床常规M蛋白的分型与鉴定。通常用于单克隆Ig增殖病，单克隆Ig病，本周蛋白和游离轻链病、多组份单克隆Ig病，重链病、脑脊液寡克隆蛋白鉴别、多克隆Ig病的诊断和鉴别诊断。免疫固