2.在灼烧接种环之后，为什么要等其冷却后再进行划线？以免接种环温度太高，杀死菌种。3.在作第二次以及其后的划线操作时，为什么总是从上一次划线的末端开始划线？划线后，线条末端细菌的数目比线条起始处要少，每次从上一次划线的末端开始，能使细菌的数目随着划线次数的增加而逐步减少，最终能得到由单个细菌繁殖而来的菌落。第31页，共43页，星期日，2025年，2月5日第1页，共43页，星期日，2025年，2月5日课题1微生物的实验室培养第2页，共43页，星期日，2025年，2月5日微生物的类群微生物原核类:真核类非细胞类：细菌、支原体、放线菌、蓝藻个体微小、结构简单酵母菌、霉菌、食用菌真菌：原生生物：藻类、原生动物（如：草履虫、变形虫等）病毒、类病毒、朊病毒◆微生物的共同特点：微生物基础知识第3页，共43页，星期日，2025年，2月5日一、基础知识（一）培养基1、概念人们按照微生物对营养物质的不同需求，配制出供其生长繁殖的营养基质。2、培养基的类型和用途（1）按物理性质划分：①液体培养基③半固体培养基②固体培养基注：（固体、半固体培养基需添加凝固剂，如琼脂；两者的差别是添加量的多、少；液体培养基不加凝固剂。）（工业生产）（微生物保存、分离、鉴定、活菌计数）（观察微生物的运动、分类、鉴定）第4页，共43页，星期日，2025年，2月5日液体培养基与固体培养基第5页，共43页，星期日，2025年，2月5日（2）按化学成分划分：①合成培养基培养基成分明确（用化学成分已知的化合物配制）（微生物的分类、鉴定）②天然培养基含化学成分不明的天然物质（工业生产）（3）按用途划分：①选择培养基加入某种化学物质，以抑制不需要的微生物的生长，促进所需要微生物的生长。（分离微生物、进行选择培养。）②鉴别培养基根据微生物的代谢特点，在培养基中加入某种指示剂或化学药品配制而成的，用以鉴别不同种类的微生物。（微生物的鉴定）第6页，共43页，星期日，2025年，2月5日青霉素抗青霉素基因基因工程，对导入重组质粒的大肠杆菌的筛选选择培养基第7页，共43页，星期日，2025年，2月5日不加含碳有机物的无碳培养基:分离自养型微生物加入青霉素的培养基:分离酵母菌、霉菌等真菌加入高浓度食盐的培养基:分离金黄色葡萄球菌不加氮源的无氮培养基:分离固氮菌第8页，共43页，星期日，2025年，2月5日伊红－美蓝AABBCCDD大肠杆菌在伊红－美蓝培养基上菌落呈现黑色注：病毒专性活细胞寄生，目前不能利用人工培养基来培养，需接种在动植物组织中才能增值。常用于培养动物病毒的是活鸡胚。鉴别培养基第9页，共43页，星期日，2025年，2月5日3、培养基的成分不管哪种培养基，一般都含有水、碳源、氮源和无机盐。（1）碳源为微生物提供所需碳元素的营养物质，需要量最大。①概念：②来源：无机碳源：CO2、NaHCO3等（自养型微生物）有机碳源：糖类（异养型微生物）、脂肪酸、花生粉饼、石油等③作用：构成微生物的细胞物质和一些代谢产物；思考：大肠杆菌，硝化细菌，蓝藻，乳酸菌分别选用哪种碳源？糖类，二氧化碳，二氧化碳，糖类第10页，共43页，星期日，2025年，2月5日（2）氮源①概念：为微生物提供所需氮元素的营养物质。②来源：无机氮源：N2、NH3、NH4+、NO3-等。（固氮微生物，硝化细菌）有机氮源：尿素、牛肉膏、蛋白胨、氨基酸等（异养型微生物）③作用：主要用于合成蛋白质、核酸以及含氮的代谢产物。注：“含C、N”的有机物常是异养微生物的氮源，也是碳源，即有些化合物作为营养要素成分时并不是单一方面的作用。思考：培养根瘤菌、大肠杆菌、硝化细菌时分别需要哪一类氮源？N2，铵盐或硝酸盐，NH3第11页，共43页，星期日，2025年，2月5日（3）水（4）无机盐（5）培养基内所需的其他条件①概念：微生物生长不可缺少的微量有机物。注：并不是所有微生物都需要添加特殊营养物质，有些需要添加，原因是它们自身缺乏合成这些物质的酶或合成能力有限。如：培养乳酸杆菌需要在培养基中添加维生素。②来源：维生素、氨基酸、碱基等。③作用：酶、核酸的组成成分。Ⅰ、特殊营养物质（生长因子）第12页，共43页，星期日，2025年，2月5日Ⅱ、pH值如:培养霉菌需酸性、培养细菌需中性或微碱性。Ⅲ、氧气的含量如:培养厌氧微生物时需要提供无氧的条件。4、培养基的配制原则（1）目的要明确（根据微生物的种类、培养目的）（2）营养协调（注意营养物质的浓度和比例）（3）pH适宜（4）温度适宜第13页，共43