LOGO第1页，共35页，星期日，2025年，2月5日主要内容液相色谱方法开发实例3.液相色谱方法开发过程2.液相色谱基础知识1.第2页，共35页，星期日，2025年，2月5日一液相色谱基础知识液相色谱法：利用组分在两相间分配系数不同而进行分离的技术移动相：携带样品流过整个系统的流体固定相：静止不动的一相-色谱柱第3页，共35页，星期日，2025年，2月5日色谱分离的机理色谱是一种分离技术色谱分离是一个物理过程流动相（MobilePhas）固定相（StationaryPhase）样品（溶解于流动相中的溶质）第4页，共35页，星期日，2025年，2月5日液相色谱分离机理高效液相色谱是一种以液体作流动相和固体微粒作固定相，待测组分在柱内的两相之间进行高速分配和高效分离的柱液体色谱方法。样品溶液中的各组分，因其物理化学性质的微小差异，当其随流动相进入色谱柱后，便在柱的两相之间产生不同的相互作用力，从而导致柱上迁移速率的微小差异。随着流动相的连续推移，这种微小的差异被不断扩大，直至柱内出现明显不同的迁移距离，使最终达到组分完全分离。第5页，共35页，星期日，2025年，2月5日液相色谱的基本流程图流动相泵色谱柱检测器泵输液分离柱检测器记录AEGBCDF进样阀进样第6页，共35页，星期日，2025年，2月5日HPLC的仪器配置色谱泵色谱柱及柱温箱检测器数据处理系统溶剂自动进样器第7页，共35页，星期日，2025年，2月5日液相色谱图相关术语色谱图(chromatogram)—样品流经色谱柱和检测器，所得到的信号-时间曲线，又称色谱流出曲线(elutionprofile)。基线(baseline)—经流动相冲洗，柱与流动相达到平衡后，检测器测出一段时间的流出曲线。一般应平行于时间轴。噪音(noise)—基线信号的波动。通常因电源接触不良或瞬时过载、检测器不稳定、流动相含有气泡或色谱柱被污染所致。漂移(drift)—基线随时间的缓缓变化。主要由于操作条件如电压、温度、流动相及流量的不稳定所引起，柱内的污染物或固定相不断被洗脱下来也会产生漂移。峰底—基线上峰的起点至终点的距离。峰高(peakheight，h)—峰的最高点至峰底的距离。峰面积(peakarea，A)—峰与峰底所包围的面积。第8页，共35页，星期日，2025年，2月5日液相色谱图相关术语色谱峰(peak)—组分流经检测器时响应的连续信号产生的曲线。流出曲线上的突起部分。正常色谱峰近似于对称形正态分布曲线（高斯Gauss曲线）。不对称色谱峰有两种：前延峰(leadingpeak)和拖尾峰(tailingpeak)。拖尾因子(tailingfactor，T)—是用以衡量色谱峰的对称性，也称为对称因子(symmetryfactor)或不对称因子(asymmetryfactor)。《中国药典》规定T应为0.95~1.05。T＜0.95为前延峰，T＞1.05为拖尾峰。峰宽(peakwidth，W)—峰两侧拐点处所作两条切线与基线的两个交点间的距离。半峰宽(peakwidthathalf-height，Wh/2)—峰高一半处的峰宽。标准偏差(standarddeviation，σ)—正态分布曲线x＝±1时（拐点）的峰宽之半。正常峰的拐点在峰高的0.607倍处。标准偏差的大小说明组分在流出色谱柱过程中的分散程度。σ小，分散程度小、极点浓度高、峰形瘦、柱效高；反之，σ大，峰形胖、柱效低。第9页，共35页，星期日，2025年，2月5日液相色谱图相关参数?定性参数（保留值）?柱效参数?相平衡参数—容量因子k—选择性因子a?分离参数第10页，共35页，星期日，2025年，2月5日定性参数（保留值）?死时间(deadtime，t0)—不保留组分的保留时间。即流动相（溶剂）通过色谱柱的时间。?死体积(deadvolume，V0)—由进样器进样口到检测器流动池未被固定相所占据的空间。V0＝F×t0（F为流速）?保留时间(retentiontime，tR)—从进样开始到某个组分在柱后出现浓度极大值的时间。?保留体积(retentionvolume，VR)—从进样开始到某组分在柱后出现浓度极大值时流出溶剂的体积。又称洗脱体积。VR＝F×tR。?调整保留时间(adj