第1页，共33页，星期日，2025年，2月5日一生理生化试验微生物生化反应是指用化学反应来测定微生物的代谢产物，生化反应常用来鉴别一些在形态和其它方面不易区别的微生物。因此微生物生化反应是微生物分类鉴定中的重要依据之一。第2页，共33页，星期日，2025年，2月5日1．氧化型与发酵型(O／F)的测定
原理:?不同细菌对不同的糖分解能力及代谢产物不同，这种能力因是否有氧气的存在而异，有氧条件下称为氧化，无氧条件下称为发酵。这在区别微球菌与葡萄球菌、肠杆菌科成员中尤其有意义。微球菌、非发酵菌均阴性，葡萄球菌和肠杆菌科细菌均阳性
第3页，共33页，星期日，2025年，2月5日2．糖类分解试验不同微生物分解利用糖类的能力有很大差异，或能利用或不能利用，能利用者，或产气或不产气。可用指示剂及发酵管检验。试验方法：以无菌操作，用接种针或环移取纯培养物少许，接种于发酵液体培养基管，若为半固体培养基，则用接种针作穿刺接种。接种后，置36±1.0°C培养，每天观察结果，检视培养基颜色有无改变（产酸），小倒管中有无气泡，微小气泡亦为产气阳性。指示剂为酚红、溴甲酚紫，溴百里蓝和An-drade指示剂。第4页，共33页，星期日，2025年，2月5日糖酵解试验枸椽酸盐试验（－＋）第5页，共33页，星期日，2025年，2月5日3.V-P试验某些细菌在葡萄糖蛋白胨水培养基中能分解葡萄糖产生丙酮酸，丙酮酸缩合，脱羧成乙酰甲基甲醇，后者在强碱环境下，被空气中氧氧化为二乙酰，二乙酰与蛋白胨中的胍基生成红色化合物，称V－P（+）反应。（－）阴性V-P试验阳性（＋）第6页，共33页，星期日，2025年，2月5日4.甲基红（MethylRed）试验肠杆菌科各菌属都能发酵葡萄糖，在分解葡萄糖过程中产生丙酮酸，进一步分解中，由于糖代谢的途径不同，可产生乳酸，琥珀酸、醋酸和甲酸等大量酸性产物，可使培养基PH值下降至pH4.5以下，使甲基红指示剂变红。大肠杆菌：MR+/VP-第7页，共33页，星期日，2025年，2月5日某些细菌能分解蛋白胨中的色氨酸，生成吲哚。吲哚的存在可用显色反应表现出来。吲哚与对二甲基氨基苯醛结合，形成玫瑰吲哚，为红色化合物5、吲哚(靛基质)试验第8页，共33页，星期日，2025年，2月5日尿素酶试验6.尿素酶（Urease）试验有些细菌能产生尿素酶，将尿素分解、产生2个分子的氨，使培养基变为碱性，酚红呈粉红色。第9页，共33页，星期日，2025年，2月5日7.氧化酶（Oxidase）试验氧化酶亦即细胞色素氧化酶，为细胞色素呼吸酶系统的终末呼吸酶，氧化酶先使细胞色素C氧化，然后此氧化型细胞色素C再使对苯二胺氧化，产生颜色反应。第10页，共33页，星期日，2025年，2月5日8.硫化氢（H2S）试验有些细菌可分解培养基中含硫氨基酸或含硫化合物，而产生硫化氢气体，硫化氢遇铅盐或低铁盐可生成黑色沉淀物。第11页，共33页，星期日，2025年，2月5日9.枸椽酸盐试验：某些细菌能利用枸椽酸盐作为碳源，及磷酸铵作为氮源，将枸椽酸盐分解为二氧化碳，培养基反应后成碱性，由于指示剂的作用，培养基变为兰色第12页，共33页，星期日，2025年，2月5日10、触酶试验???
???原理?:本试验是检测细菌有无触酶的存在。过氧化氢的形成看作是糖需氧.分解的氧化终末产物，因为H202的存在对细菌是有毒性的，细菌产生酶将其分解，这些酶为触酶(过氧化氢酶)和过氧化物酶。
???试剂?3％H202(新配)。
???试验方法:可用接种环将一菌落放于载玻片的中央，加l滴3％H202于菌落上，立即观察有无气泡出现，也可在菌落和H202混合物之上放一张盖玻片，可帮助检出轻度反应，还可降低细胞的气溶胶颗粒的形成。或直接将3％H202加到培养琼脂斜面或平板上直接观察有无气泡出现第13页，共33页，星期日，2025年，2月5日11．淀粉水解试验
???原理:?有的细菌具有淀粉酶，能水解培养基中的淀粉成麦芽糖。淀粉水解后遇碘液不再呈蓝紫色反应。???
??试验方法:?将细菌划线接种于3％可溶性淀粉琼脂平板上，在37度培养24h。取出平板，在菌落处滴加碘液少许，观察。培养基呈深蓝色，说明淀粉未被水解，即淀粉酶阴性。能水解淀粉的细菌其菌落周围有透明的环(即淀粉酶阳性)。
第14页，共33页，星期日，2025年，2月5日12．石蕊牛乳试验
???原理?石蕊是一种pH指示剂，当pH升至8．3