1、如何获得化学性质单一、特异性强的抗体？单克隆抗体问题讨论提示：1.什么样的细胞可以产生抗体？2.什么样的细胞可以无限增殖？2、瘤细胞和癌细胞有何区别？共同点：两者都有无限增殖的能力不同点：瘤细胞不能转移第20页，共49页，星期日，2025年，2月5日设计方案：一个B淋巴细胞－－只分泌一种特异性抗体小鼠骨髓瘤细胞－－能无限增殖杂种细胞单克隆抗体第21页，共49页，星期日，2025年，2月5日实验目的:制备单克隆抗体.实验原理：B淋巴细胞能产生抗体，骨髓瘤细胞能无限增殖，杂交瘤细胞既能产生抗体又能无限增殖。实验材料：小白鼠实验器材：培养皿、针筒等等。实验过程：如下页根据阿根廷科学家米尔斯坦和德国科学家柯勒设计的实验方案:第22页，共49页，星期日，2025年，2月5日B淋巴细胞注射特定抗原蛋白骨髓瘤细胞培养骨髓瘤细胞融合（只考虑两两融合）培养液中细胞有几种类型？融合细胞几种类型？骨髓瘤细胞---骨髓瘤细胞B淋巴细胞---B淋巴细胞B淋巴细胞---骨髓瘤细胞多种杂交细胞在具有筛选作用的培养基上培养专一抗体检验阳性克隆上述杂交细胞分开不同杂交细胞，克隆专一抗体，检验阳性细胞单克隆抗体注射到小鼠体内体外培养（二）、单克隆抗体的制备过程第1次筛选目的：得到杂交瘤细胞（多种）。第2次筛选目的：在杂交瘤细胞中筛选出能产生所需抗体的杂交瘤细胞。该细胞继承双亲细胞的遗传特性，既能产生专一抗体又能无限增殖。杂交瘤细胞有何特点？特异性强，灵敏度高第23页，共49页，星期日，2025年，2月5日腹腔注射法第24页，共49页，星期日，2025年，2月5日免疫小鼠培养骨髓瘤细胞融合骨髓瘤细胞B淋巴细胞注射特定抗原蛋白选择培养基上培养专一抗体检验阳性专一抗体检验阳性注射到小鼠体内体外培养单克隆抗体克隆杂交细胞分开不同杂交细胞，克隆专一抗体，检验阳性细胞多种杂交细胞杂交瘤细胞有何特点？本过程利用的那些技术？动物细胞融合技术动物细胞培养技术是否注射抗原（只考虑两两融合）培养液中细胞有几种类型？几种融合细胞？两次筛选的目的分别是什么？（二）、单克隆抗体制备过程与传统制备的抗体相比具有什么特点？第25页，共49页，星期日，2025年，2月5日①诊断疾病（识别作用，如同位素标记单克隆抗体，可诊断肿瘤、心血管畸形等）（三）单克隆抗体的应用优点：准确、高效、简易、快速②用于治疗疾病和运载药物（主要用于癌症治疗，也可运载药物，如“生物导弹”）（导向作用，作为载体，生物导弹=单克隆抗体+药物，治疗肿瘤）（位置准确、疗效高、副作用小）诊断乳腺癌单克隆抗体第26页，共49页，星期日，2025年，2月5日小结两个过程动物细胞融合过程动物细胞培养过程“一二三”二次筛选—筛选杂交瘤细胞、能产生所需抗体的杂交瘤细胞一个新细胞——杂交瘤细胞三个优势——产量大、特异性强、灵敏度高(理化性质单一)的优势单克隆抗体第27页，共49页，星期日，2025年，2月5日2、动植物细胞在结构上有何区别？这与它们杂交或融合过程有什么影响？3、植物体细胞杂交诱导原生质体融合常用的方法有哪些？离心、振动、电激等物理方法；PEG等化学方法问题讨论动物细胞无细胞壁，动物细胞融合过程中不须去除细胞壁和再生出细胞壁。１、植物体细胞杂交最终得到的是完整的植物个体，动物细胞融合后能形成杂种动物个体吗？不能，只能得到杂交细胞第28页，共49页，星期日，2025年，2月5日4、动物细胞融合能利用上述两类方法吗？还有其他方法吗？能，还可以利用灭活的病毒（生物方法）进行诱导问题讨论５、动物细胞融合与植物原生质体融合的基本原理是否相同？相同，都是细胞膜的流动性第29页，共49页，星期日，2025年，2月5日问题讨论7、动物细胞融合有什么意义？6、为什么要用灭活的病毒？病毒一般对生物体是有伤害的。仙台病毒物理或化学方法丧失感染活性保留融合活性突破了有性杂交方法的局限，使远源杂交成为可能。第30页，共49页，星期日，2025年，2月5日有何同？不同？动物细胞融合动物细胞融合第31页，共49页，星期日，2025年，2月5日植物体细胞杂交与动物细胞融合的比较细胞工程植物体细胞杂交动物细胞融合实质内容改变遗传物质、产生新的性状，获得细胞产品(使后代具有双亲的特性)理论基础细胞膜的流动性;植物细胞全能性细胞膜的流动性;细胞增殖诱导手段物理法：离心、振动、电激化学法：