第1页，共22页，星期日，2025年，2月5日录像：球菌操作：1、化脓性球菌分离鉴定（二）（1）革兰染色（2）转种甘露醇或血清肉汤（3）血浆凝固酶实验（4）触酶实验2、肠道菌分离鉴定（一）——粪便标本接种S.S平板材料：（1）载玻片1-2张/人（2）甘露醇或血清肉汤1支/人（3）新鲜兔血浆、生理盐水各1支/6人（4）S.S平板1块/人（5）粪便标本：伤寒、痢疾、副甲、副乙1套/教室实验内容第2页，共22页，星期日，2025年，2月5日了解：肠道致病菌的血清学鉴定触酶实验、血浆凝固酶实验的原理掌握：1.肠道致病菌分离鉴定的方法、步骤及生化反应2.化脓性球菌转种甘露醇或血清肉汤的目的3.触酶、血浆凝固酶实验的结果观察[教学目标]第3页，共22页，星期日，2025年，2月5日观察上次实验结果、进行分析紫外线杀菌实验第4页，共22页，星期日，2025年，2月5日抗生素敏感试验抑菌圈直径第5页，共22页，星期日，2025年，2月5日如果细菌对药物敏感，则在药片周围有抑菌圈形成，敏感度越高抑菌圈直径越大：20mm：极度敏感5-20mm：中度敏感10-15mm：轻度敏感10mm:不敏感无抑菌圈:耐药第6页，共22页，星期日，2025年，2月5日化脓性球菌分离鉴定（二）脓汁血平板菌落葡萄状排列链状排列血浆凝固酶实验甘露醇发酵实验血清肉汤管接种三线法37℃24h革兰染色触酶实验排列不典型第7页，共22页，星期日，2025年，2月5日2、操作革兰染色及镜检触酶实验血浆凝固酶实验转种甘露醇或血清肉汤第8页，共22页，星期日，2025年，2月5日涂片：先在玻片上放一滴生理盐水，然后刮取菌落在盐水中乳化，涂成直径约为1.0cm的膜。干燥：最好在室温中自然干燥，也可在远离火焰上方微微烘干。但切勿靠火焰以免烤焦标本。固定：火焰固定。革兰染色过程：初染：结晶紫1分钟媒染：碘液1分钟脱色：95%酒精半分钟复染：稀释复红半分钟镜检：球阳杆阴阳紫阴红（1）革兰染色第9页，共22页，星期日，2025年，2月5日葡萄球菌链球菌第10页，共22页，星期日，2025年，2月5日H2O2catalase2H2O+O2（2）触酶实验原理：产生过氧化氢酶的细菌，能催化过氧化氢生成水和分子氧出现气泡。操作步骤：在洁净玻片上滴一滴生理盐水，用接种环取少许细菌培养物与生理盐水中乳磨均匀，然后加3％过氧化氢数滴；或直接滴加3％过氧化氢于不含血液的细菌培养物中，立即观察结果。第11页，共22页，星期日，2025年，2月5日结果观察：有大量气泡产生者为阳性。不产生气泡者为阴性。G+球菌中，葡萄球菌和微球菌均产生过氧化氢酶，而链球菌属为阴性，故此试验常用于G+球菌的初步分群第12页，共22页，星期日，2025年，2月5日（3）血浆凝固酶试验1）原理致病性葡萄球菌能产生血浆凝固酶，在血浆中激活剂的作用下，可使血浆中的纤维蛋白原转变为不溶性的纤维蛋白，导致血浆凝固；而非致病性葡萄球菌由于不产生此酶，故不能凝固血浆，二者可据此予以区别。第13页，共22页，星期日，2025年，2月5日2）操作：玻片法取干净玻片一块血浆及生理盐水各一滴，分别置于玻片两端用接种环取细菌少许，分别与生理盐水及血浆充分混匀结果观察：30秒钟内盐水中的细菌呈均匀浑浊，而兔血浆则呈块状或颗粒状者为阳性。第14页，共22页，星期日，2025年，2月5日（4）甘露醇试验或血清肉汤接种1）甘露醇发酵试验：接种甘露醇单糖管，观察颜色改变及气体产生情况。发酵甘露醇产酸者，使酸碱指示剂（溴麝香草酚兰）在酸性环境下由蓝色转变为黄色。2）接种血清肉汤：观察细菌生长状态沉淀生长？混浊生长？部分沉淀，上清液混浊生长？第15页，共22页，星期日，2025年，2月5日肠道菌