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文档摘要

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冰冻切片免疫荧光染色流程(表面分子，以CD4为例)

冰冻切片室温晾干15分钟；

用组化油笔将待染组织圈好，置PBS中浸泡10分钟，以清除OCT；

用含10％正常山羊血清旳PBS室温封闭切片1小时（此步可以不洗涤，把封闭液吸干即可）；

加入CD4单抗(1:100;SeroTec,Inc,Raleigh,NC,USA)，4℃

PBS洗3次，每次10分钟；

加入罗丹明标记旳羊抗小鼠旳IgG二抗(1:50;Sigma公司)，37℃

PBS洗3次，每次15分钟；

封片后，荧光显微镜观测成果并拍照；

在每切片中随机选择5个视野计数阳性细胞数。

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注意事项：（1）整个实验过程中勿使表面干燥