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西红花球茎中吲哚乙酸和吲哚丁酸的测定液相色谱-串联质谱法
1范围
本文件规定了西红花球茎中吲哚乙酸和吲哚丁酸的液相色谱-串联质谱检测方法。
本文件适用于西红花球茎中吲哚乙酸和吲哚丁酸的测定。
2规范性引用文件
下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。
GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法
3术语和定义
本文件没有需要界定的术语和定义。
4原理
试样用甲醇提取，经固相萃取柱净化，浓缩后供液相色谱-串联质谱仪测定，外标法定量。
5试剂与耗材
除另有说明外，水为GB/T6682规定的一级水。
5.1试剂
5.2乙腈（CH3CN，CAS号75-05-8）：色谱纯。
5.3甲醇（CH3OH，CAS号67-56-1）:色谱纯。
5.4甲酸（HCOOH，CAS号64-18-6）：色谱纯。
5.5乙醇（C2H5OH，CAS号64-17-5），色谱纯。
5.650%甲醇溶液:取等体积的甲醇和水混匀。
5.70.1%甲酸溶液：取1.0mL甲酸（4.1.3）用1000mL水稀释并定容。
5.8乙腈-0.1%甲酸溶液(4+6)：量取40mL乙腈与60mL的0.1%甲酸溶液（4.1.6），混匀。
5.9标准品
5.10吲哚乙酸标准物质（C10H9NO2）：CAS号87-51-4，纯度≥98%。
5.11吲哚丁酸标准物质（C12H13NO2）：CAS号133-32-4，纯度≥98%。
5.12吲哚乙酸、吲哚丁酸标准储备液：100.0μg/mL。准确称取适量（精确至0.1mg）的吲哚乙酸、吲哚丁酸标准物质（4.2.1、4.2.2），分别用少量甲醇溶解并转移至100mL容量瓶中，分别用甲醇定容至刻度，混匀，-18℃以下避光保存6个月。
5.13混合标准储备溶液：分别从标准储备溶液（4.2.3）准确移取上述吲哚乙酸、吲哚丁酸标准储备液1.0mL至100mL容量瓶中，用甲醇定容至刻度，混匀，浓度为1.0μg/mL，0～4℃以下避光保存。
5.14混合标准工作溶液：根据需要用甲醇稀释配制成浓度为2.0μg/L、4.0μg/L、20.0μg/L、50.0μg/L、100.0μg/L、200.0μg/L、500.0μg/L的标准工作溶液。混合标准工作溶液应现用现配。
5.15材料
5.15.1HLB固相萃取柱（N-乙烯基吡咯烷酮-二乙烯基苯）：200mg/6mL，使用前用5mL甲醇和5
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mL水预处理。
5.15.2滤膜：0.22μm，有机相。
5.15.3离心管。
5.15.4150mL梨形瓶。
6仪器和设备
6.1液相色谱-串联质谱：配备电喷雾离子源（ESI）。
6.2离心机：4000r/min。
6.3超声波清洗器：100kHz。
6.4分析天平：感量0.1mg。
6.5旋转蒸发仪。
6.6均质机。
6.7涡旋混合仪。
7样品
取有代表性的试样100克，装入干净的容器内匀浆混匀，放入聚乙烯瓶中。将试样按照测试与备用分别存放，于-18℃保存。在抽样及制样的操作过程中，应防止样品受到污染或待测物发生含量的变化。
8试验步骤
8.1提取和净化
准确称取5g试样（精确至0.1mg）于50mL离心管中，用50mL甲醇（4.1.2）分两次提取，每次25mL，涡旋混匀，超声提取10min后，以4000r/min速度离心5min，合并上清液。
将提取的上清液全部过柱，通过后，依次以50%甲醇溶液（4.1.5）和5mL水洗涤，流速不超过2d/s,弃去淋洗液，负压抽干，用5mL甲醇洗脱，收集洗脱液于梨形瓶中，40℃以下旋至近干，用乙腈-0.1%甲酸溶液（4.1.7）溶解，并定容至1mL，经微孔滤膜过滤，供液相色谱-串联质谱测定。
8.2测定
8.2.1液相色谱参考条件
a)色谱柱：BEHC18，1.7μm，5cm×0.21cm（内径）或相当者；
b)柱温：35℃;
c)流动相：乙腈+5mmoL/L乙酸铵（35+65，体积比）；
d)流速：0.200mL/min；
e)进样量：10μL。
8.2.2质谱参考条件
a)电离方式：ESI；
b)扫描方式：正离子