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甘蓝型油菜原生质体制备方法及瞬时表达转化技术研究

摘要

本研究以甘蓝型油菜ZY511为试验材料，通过酶解法去除细胞壁并结合手动去除叶片下表皮的预处理，以及利用PEG(聚乙二醇)介导的转化，构建出甘蓝型油菜叶片的一种简单而高效的原生质体分离和瞬时转化的方法。为后续研究目标功能基因的亚细胞定位分析和利用原生质体进行相关基因的遗传转化等研究方面提供新的研究手段和理论基础。本论文利用去除下表皮酶解法获得高产量且破损率较低的原生质体，制备的原生质体不需要二次纯化可以直接用于原生质体的转化。为了检验分离制备的原生质体是否具有功能性，将pCAMBIA1300(GFP)接Fd2基因的质