*

《单克隆抗体完整分子量测定液相色谱-飞行时间质谱联用法》标准立项与发展研究报告

EnglishTitle:DevelopmentReportontheStandardizationProjectof“DeterminationofIntactMolecularWeightofMonoclonalAntibodiesbyLiquidChromatography-Time-of-FlightMassSpectrometry”

摘要

随着生物医药产业的迅猛发展，单克隆抗体（mAb）作为一类重要的治疗性生物制品，其质量控制与表征分析已成为行业关注的核心。分子量是单克隆抗体最基础、最关键的质量属性之一，其精确测定对于确认抗体类型、识别翻译后修饰（如糖基化、氧化、脱酰胺等）、评估产品异质性与稳定性至关重要。国际人用药品注册技术协调会（ICH）指南及各国药典均将其列为理化表征的基本要求。然而，目前国内外尚缺乏针对单克隆抗体完整分子量测定的标准化方法，导致不同实验室间分析方法不一，数据可比性与溯源性难以保证，制约了行业的高质量发展。

本报告旨在系统阐述《单克隆抗体完整分子量测定液相色谱-飞行时间质谱联用法》标准立项的必要性、可行性、技术内容与创新价值。报告指出，液相色谱-飞行时间质谱（LC-TOFMS）联用技术凭借其高分辨率、高准确度、高灵敏度及宽动态范围的优势，已成为单抗完整质量分析的首选工具。本标准的制定将首次系统规范该方法的仪器校准、样品前处理、数据采集与处理流程，将测定误差控制在±20Da以内，并能同步获取糖型分布、修饰比例等关键质量信息。该标准的建立将填补国内相关领域标准空白，统一行业检测方法，提升数据可靠性与可比性，为单克隆抗体的研发、生产、质控及监管提供强有力的技术支撑，对推动我国生物医药产业标准化、国际化进程具有深远意义。

关键词：

单克隆抗体；完整分子量；液相色谱-飞行时间质谱；标准化；质量控制；翻译后修饰；生物制品；方法验证

Keywords:

MonoclonalAntibody;IntactMolecularWeight;LiquidChromatography-Time-of-FlightMassSpectrometry;Standardization;QualityControl;Post-TranslationalModification;Biologics;MethodValidation

正文

一、立项背景与目的意义

1.1立项的必要性与紧迫性

单克隆抗体（MonoclonalAntibody,mAb）是由单一B细胞克隆产生的、具有高度特异性和均一性的抗体。自杂交瘤技术问世以来，单克隆抗体已成为生物科学研究和生物医药产业的核心工具与产品，在肿瘤、自身免疫性疾病、感染性疾病等多个治疗领域取得了革命性进展。

分子量作为单克隆抗体最基础的特征参数，其精确测定是进行后续深入研究与应用的前提。与小分子药物不同，单克隆抗体结构复杂，其分子量并非固定值，而是会受到一系列翻译后修饰和降解过程的显著影响。例如，C-末端赖氨酸丢失、N-连接糖基化的异质性、天冬酰胺脱酰胺、甲硫氨酸氧化、二硫键错配以及聚合/片段化等，都会导致分子量发生微小但关键的变化。这些变化直接影响抗体的稳定性、生物学活性、免疫原性及药代动力学性质。因此，精确测定完整分子量及其分布，是全面表征单克隆抗体质量属性、确保产品安全有效的关键环节。

国际上，ICHQ6B《生物技术产品及生物制品的测试方法与可接受标准》、《欧洲药典》（EP）、《美国药典》（USP）及《中国药典》（ChP）均明确将基于质谱的分子量测定和翻译后修饰分析列为单克隆抗体理化表征的基本要求。然而，一个突出的问题是，现有药典和通用技术要求多侧重于原则性规定，缺乏具体、可操作、标准化的检测方法指南。这导致各研发机构、生产企业、第三方检测实验室及监管机构在实践中所采用的分析策略、仪器参数、数据处理方法不尽相同，所得数据的准确度、精密度和可比性存在差异，为产品的质量评价、技术转移和监管审评带来了挑战。

为保障我国生物制品产业的高质量发展，提升行业整体技术水平，确保检测结果的科学、公正、可比与可溯源，亟需建立一套科学、严谨、统一的单克隆抗体完整分子量测定国家标准。液相色谱-飞行时间质谱（LC-TOFMS）联用法因其卓越的质量分辨率、精确的质量测定能力、快速的扫描速度以及对复杂生物大分子的良好兼容性，已成为该领域的主流和优选技术。为此，制定《单克隆抗体完整分子量测定液相色谱-飞行时间质谱联用法》标准，对于规范行业实践、引领技术创新、接轨国际标准具有重大的现实意义和战略价值。

1.2技术可行性分析

（1）质谱法是