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人食管胃结合部腺癌类器官的构建与保藏操作指南
1范围
本文件提供了人食管胃结合部腺癌类器官构建方法、传代、冻存以及复苏方法的指导。
本文件适用于科研用人食管胃结合部腺癌类器官的原代培养、传代、冻存和复苏。
2规范性引用文件
下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。
GB/T38736-2020人类生物样本保藏伦理要求
3术语和定义
下列术语和定义适用于本文件。
3.1
人食管胃结合部腺癌类器官OrganoidsofHumanEsophagogastricJunctionAdenocarcinoma
从人体食管与胃交界区域的腺癌组织中提取肿瘤细胞，经酶解分离后在基质胶和生长因子的三维培养体系中诱导形成的具有食管胃结合部肿瘤细胞组成、空间结构及生理功能特征的微型组织模型。
3.2
人食管胃结合部腺癌类器官培养基Theculturemediumfororganoidsofhuman
esophagogastricjunctionadenocarcinoma
用于培养该部位腺癌类器官的特殊营养体系，以高级杜氏改良伊格尔培养基与营养混合物F12等为基础培养基，添加基质胶构建三维支撑环境，搭配重组人表皮生长因子、重组人成纤维细胞生长因子等生长因子维持细胞增殖分化，并辅以抗生素、抗氧化剂等添加剂，确保类器官的存活、生长与功能稳定。
3.3
3D培养基质胶3DCultureMatrigel
模拟体内细胞外基质微环境的生物材料，由天然提取物（如含层粘连蛋白、胶原蛋白）构成，通过温度或化学交联形成具有三维网络结构的水凝胶。其能为细胞提供立体黏附位点与生长支架，支撑细胞在三维空间中自组装、增殖及分化，适用于类器官三维模型培养。
3.4
人食管胃结合部腺癌类器官传代PassagingofHumanEsophagogastricJunctionAdenocarcinomaOrganoids
即当类器官在3D培养基质胶中生长至一定密度或体积时，通过机械剪切和酶消化将其离散为单细胞或小细胞团，再按比例接种到新的含有基质胶与专用培养基的培养体系中，使其重新形成具有腺管样结构、保留原肿瘤细胞生物学特性的类器官群体的过程。
3.5
人食管胃结合部腺癌类器官冻存CryopreservationofHumanEsophagogastricJunctionAdenocarcinomaOrganoids
将该部位来源的类器官经消化离散后，用冻存液处理，梯度降温至-80℃,再转入液氮保存，以维持其生物学活性和肿瘤特性，复苏后可继续用于研究的低温保存技术。
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3.6
人食管胃结合部腺癌类器官复苏ThawingofHumanEsophagogastricJunctionAdenocarcinomaOrganoids
将冻存的类器官从低温环境取出，经快速升温溶解冻存液，再通过离心、换液等操作，接种至基质胶与培养基中，使其恢复三维生长和生物学活性的过程。
3.7
知情同意InformedConsent
供体对生物样本捐赠的目的和研究用途等明了和认可。以生物样本供方自愿同意参与为原则，以当事双方共同签署知情同意书为具体体现。
【来源：GB/T38736-2020；3.7】
4缩略语
下列缩略语适用于本文件。
PBS：磷酸盐缓溶液（Phosphatebuffersolution）
ATP：腺嘌呤核苷三磷酸(AdenosineTriphosphate)
IC50：半抑制浓度（halfmaximalinhibitoryconcentration）
HE：苏木精-伊红染色（Hematoxylin-Eosin）
PAS：过碘酸-雪夫染色（PeriodicAcid-Schiff）
Ki67：Ki67抗原（Ki-67Antigen）
CEA：癌胚抗原（CarcinoembryonicAntigen）
CK7：细胞角蛋白7（Cytokeratin7）
Cadherin17：钙粘蛋白17（Cadherin17）
胶原酶IV：胶原酶四（CollagenaseTypeIV）
DMSO：二甲基亚砜（DimethylSulfoxide）
5通则
5.1人食管胃结合部腺癌采集与处理应获得伦理委员会审批。
5.2组织采集前应签署知情同