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易错点11酶切位点的选择

[名师支招]

1.单酶切和双酶切

(1)单酶切

①过程：先用同一种限制酶切割载体和含目的基因的DNA分子，获得带有相同黏性末端或平末端的片段。再通过DNA连接酶连接平末端或相同的黏性末端，获得重组质粒。

②缺点：单酶切时，目的基因和载体的所有接口都是相同的，所以容易出现目的基因反接或自身环化，如下图所示。

(2)双酶切

①过程：利用两个不同限制酶切割目的基因和载体，使目的基因和载体均具有两个不同的黏性末端，就可以避免反接，并减少自身环化的情况。

②方向：插入位置前后分别要有启动子和终止子，保证目的基因的表达。

2.酶切位点选择

(1)不破坏目的基因和标记基因：若在目