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1第5章分子生物学研究法(上)

——DNA、RNA及蛋白质操作技术5.1重组DNA技术史话5.2DNA基本操作技术5.3RNA基本操作技术5.4基因克隆技术5.5蛋白质与蛋白质组学技术

2从20世纪中叶开始，分子生物学研究得到高速发展，主要原因是研究方法，特别是基因操作和基因工程技术的进步。基因操作主要包括DNA分子的切割与连接、核酸分子杂交、凝胶电泳、细胞转化、核酸序列分析以及基因人工合成、定点突变和PCR扩增等，是分子生物学研究的核心技术。基因工程是指在体外将核酸分子插入载体分子，构成遗传物质的新组合，使之进入原先没有这类分子的寄主细胞内并进行持续稳定的繁殖和表达。基因工程技术是核酸操作技术的一部分，强调外源核酸在另一种寄主细胞中的繁衍与性状表达。

35.1重组DNA技术史话分子生物学研究的起步主要表现在3个方面：在20世纪40年代确定了遗传信息的携带者、即基因的分子载体是DNA而不是蛋白质，解决了遗传的物质基础问题。在20世纪50年代提出了DNA分子的双螺旋结构模型和半保留复制机制，解决了基因的自我复制和世代交替问题。在20世纪50年代末至60年代，相继提出了“中心法则”和操纵子学说，成功地破译了遗传密码，阐明了遗传信息的流动与表达机制。

4但当时缺乏有效的分离和富集单一DNA分子的技术，而无法对这类物质进行