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分子生物学检测方法08PCR技术原理与应用核酸扩增原理PCR技术通过变性（95℃解链DNA）、退火（55-65℃引物结合）、延伸（72℃DNA合成）三个温度循环，实现结核分枝杆菌特异性DNA片段指数级扩增，如IS6110序列。01耐药基因检测通过设计rpoB基因特异性引物，可同步检测利福平耐药相关突变（如531位点Ser→Leu突变），指导临床用药决策。快速诊断优势相比传统培养法2-6周的周期，PCR可在24小时内完成检测，尤其适用于痰液、脑脊液等样本的结核杆菌DNA检测。02可同时扩增多个靶基因（如16SrRNA、MPB64），提高检测灵敏度至10-100个细菌/毫升