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WB内参选择指南
1、什么是内参？
内参是WesternBlot实验中用于标准化和校正实验误差的一类蛋白质。它们通常是在不同组织和细胞中表达相对恒定的蛋白质，由管家基因编码，常用作
检测目的蛋白表达水平变化时的参照物。
2、内参在WB中的作用是什么？
校正实验误差：内参用于校正蛋白质定量和上样过程中的实验误差，以保证实验结果的准确性。由于不同的样品在蛋白质提取、定量、上样等步骤中可能
存在操作误差，使用内参可以对这些误差进行校正。
半定量分析：通过比较内参和目标蛋白的信号强度，可以对实验结果进行半定量分析。如果样品蛋白量有限，只够进行一次电泳转膜实验时，分别检测样
品的内参量和目的蛋白量，然后将各样品目的蛋白量分别除以其内参含量，得到内参校正后的各样品中目的蛋白相对含量，用此数值进行样品间的比较和分析。
作为空白对照：内参可以作为空白对照，检测蛋白转膜情况是否完全，以及整个WesternBlot显色或者发光体系是否正常。
确保实验结果的可比性：在比较不同条件下或不同组织中目的蛋白表达量的相对多少时，内参提供了一个参照标准，确保了实验结果的可比性。
3、常见的WB内参有哪些？
β-Actin：β-肌动蛋白是一种细胞骨架蛋白，分子量42KDa左右，广泛分布于各种组织中，表达量丰富且相对恒定。它通常用作总蛋白的内参，尤其是在
非肌肉组织中。然而，需要注意的是，β-Actin在某些特定组织（如心肌）中的表达量可能较低，因此并非在所有情况下都适用。此外，不同的β-Actin亚型在
不同组织中的分布也有所不同，选择抗体时需考虑这一点。
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大鼠脑裂解物20μg
人结肠癌组织
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Hela细胞
GAPDH（甘油醛-3-磷酸脱氢酶）：36kD左右，GAPDH是一种广泛表达的蛋白，适用于多种细胞类型。然而，在某些条件下，如缺氧或糖尿病，GAPDH
的表达可能会受到影响，因此需要根据实验条件谨慎选择。
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1HeLawholecelllysate20ugLane
2THP-1wholecelllysate20ugLane
3MCF7wholecelllysate20ugLane
4NIH/3T3wholecelllysate20ugLane
5mousespleenlysate20ugL