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文件名称:关于WB实验中的marker,你应该知道的事.pdf
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总页数:7 页
更新时间:2025-03-12
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关于WB实验中的marker,你应该知道的事

1、什么是蛋白marker?

蛋白Marker,也称为蛋白质分子量标准(ProteinMolecularWeightMarker),是用于蛋白质电泳分析中的一系列已知分子量的蛋白质混合物。它们通

常包含多个不同分子量的蛋白质条带,这些条带在电泳过程中会根据分子量的大小和电荷差异迁移不同的距离,从而在凝胶上形成一系列有序的条带。

2、Marker在WB中的作用?

分子量标定:Marker包含一系列已知分子量的蛋白质,通过与Marker上的带状蛋白质带进行比较,可以精确地确定待测蛋白的分子量。

验证电泳和转印效果:Marker在电泳和转印的过程中移动到膜上,可以帮助研究者验证这些步骤的效果。通过检查Marker的带状分布,可以确保电泳和

转印过程中没有发生异常。

确定蛋白质迁移距离:通过测量Marker的迁移距离,可以估算待测蛋白质的迁移距离。这对于进一步的数据分析和结果解释非常重要。

标定凝胶浓度:Marker还可以用于帮助研究者选择适当的凝胶浓度。不同分子量的Marker在不同的凝胶浓度下会产生不同的迁移模式,因此可以根据

Marker的迁移特性选择合适的凝胶浓度。

3、Marker有哪些分类,各有什么特点?

天然蛋白Marker:

这类Marker是从自然来源提取的蛋白质,它们经历了天然的修饰过程,如裂解、二硫键形成、糖基化或磷酸化,并保持其复杂的3D结构。天然蛋白Marker

更接近其在体内的自然状态,这使得它们在药物开发和生物医学研究中非常有用。天然蛋白Marker可以提供更准确的分子量估计,因为它们未经过重组或合

成,保持了蛋白质的自然特性。abs9919非变性蛋白Marker(66-669kDa),经过非变性电泳后,用考马斯亮蓝染色后可以得到分布均匀、密度相近的4条

带,不适用于SDS,因为在SDS存在下,含有多个亚单位的蛋白会不同程度解聚。

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abs9919非变性蛋白Marker(66-669kDa)

变性Marker:

这类Marker在生产过程中经过了变性处理,通常是通过加热和化学物质(如SDS)的处理,以确保蛋白质完全展开成线性结构。变性Marker的优点在

于它们提供了一致的蛋白质迁移特性,这对于精确的分子量估计和实验重复性非常重要。由于变性处理,这类Marker的蛋白质保持一致的电荷和形状,使得

它们在电泳过程中的迁移更加可预测。

变性蛋白Marker一般可分为预染和非预染两种

未预染蛋白Marker:

这类Marker包括宽分子量、高分子量和低分子量蛋白标准。它们是最简单、最准确的一种,因为不附带染料分子或标记分子,所以所示大小正好是蛋白

原本的大小。缺点是在电泳过程中不可见,需要在电泳结束后经过染色才能看到,无法实时监控电泳过程。适合精确判断蛋白大小,但操作相对麻烦,需要额

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外的染色步骤。如abs9840非预染蛋白Marker(14.4-97.4kDa),用考马斯亮蓝R-250染色可得分布均匀密度相同的六个条带,产品含SDS,不适合用于非

变性胶。

abs9840非预染蛋白Marker(14.4-97.4kDa)

预染蛋白Marker:

这类Marker在生产时就结合了染料,因此在电泳过程中或转膜时可