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【光谱系列11】设计、优化和标准化评估黑色素瘤患者t细胞免疫表型的
高维光谱流式检测
ReferenceDesign,optimisationandstandardisationofahigh-dimensionalspectralflowcytometry
workflowassessingT-cellimmunophenotypeinpatientswithmelanoma
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一、背景信息
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二、绝对计数、静息、活化Panelmarkers
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三、实验结果
1、27色静息方案的门控，对T和NK细胞的表面和细胞内标记进行检测。
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单个活淋巴细胞在分裂为B细胞（CD19+）、T细胞（CD3+）和NK细胞（CD19-CD3-CD16/56+）之前依次
进行门控。根据CD16和CD56的差异表达，进一步分离NK细胞亚群。
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TCRγδ+T细胞在TCRγδ-亚群上的CD4和CD8门控之前被定义。CD4+Treg细胞（CD25+CD127/lo）在从非Treg
门控制记忆群体之前被排除。CD4+和CD8+T细胞的记忆群体被定义为幼稚（CD45RA+CCR7+CD95lo）、干细胞
样记忆（Tscm；CD45RA+CCR7+CCRCD95hi）、中央记忆（Tcm；CD45RA-CCR7+）、效应记忆CD45RO（TemRO；
CD45RA-CCR7-）和效应记忆CD45RA（TemRA；CD45RA+CCR7-）。循环中的CD4+Tfh细胞被定义为
CD45RA-CXCR5+。
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2、20色激活方案的门控，用于检测CD3/cd28刺激的T细胞产生的细胞因子。
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事件按门控顺序选择单个的、活的淋巴细胞。由于一些样本中CD3下调，在TCRγδ+细胞门控之前，T细胞从T
和NK细胞门(CD19-CD3+/-)进行门控。
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