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【血液样本处理全攻略】1——如何采集、保存
一、血液样本中的组分
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血液是在人体的循环系统、心脏、骨髓和血管腔内循环流动的一种组织,约占成人体重的1/13,血液中含水量约80%,
血液密度为1.05~1.06g/cm^3。
全血分为三个部分:血小板和血浆、有核细胞(或单个核细胞)、红细胞及分叶核细胞(粒细胞、嗜酸性粒细胞、
中性粒细胞)。
增加抗凝剂的全血自然沉降或离心处理后,在上层的淡黄色液体,称为血浆
单个核细胞可分为髓系和淋系两大部分。
髓系主要就是单核细胞、粒细胞、树突状细胞。
淋系就是我们常说的淋巴细胞,主要就是T、B、NK细)。
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外周血免疫细胞就是指外周血中各白细胞的统称。
二、采血管的选择
1不同采血管及其用途
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2采血管的选择注意事项
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3流式细胞仪研究常用分析的推荐抗凝剂和储存时间
针对后续的流式检测方法学,不同的检测靶细胞,不同的检测指标,建议推荐不同的最佳抗凝剂选择,以及不同的
稳定时长。
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三、采集后的血液该如何保存
尽管我们推荐在采集外周血后,立即进行外周血样本制备用于流式细胞术分析,但避免不了其他因素影响,比如远
距离运输,外周血样本短长期保存,保存温度等等因素
如下列出集中常见的外周血保存方式:
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不同的保存条件、保存温度、保存时间对最终结果会有何影响,通过如下文献说明:
实验workflow
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1固定剂的影响
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外周血采集到K3EDTA管中,4°C保存。样本分为三批,一批为control未经固定,一批直接用1%多聚甲醛(PFA)
固定,一批用商业化FixPerm溶液(FP)处理。
在不同时间点(0h,6h,18h,24h,30h,42h,48h,66h和72h)进行上机检测。
上机结果通过阳性群和阴性群的MFI来评估。
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