DOI:0．3242／j．cnki．bingduxuebao．0096
第24卷第3期病毒学报Vol．24No．3
2008年5月CHINESEJOURNALOFVIROLOGYMay2008
人乳头瘤病毒（HPV）58型DNA疫苗免疫原性的初步分析
吴雪伶?聂建辉?张春涛?吴瑜?赵晨燕?王佑春?
（中国药品生物制品检定所?北京00050）
摘要：为了检测HPV58型不同L基因的DNA苗的免原性?以pcDNA3?为载体分别构建含HPV58型不
同L基因的DNA苗?命名为Lh、Lh△c、LS、LSM和Lwt。用免印迹法检测各DNA苗的体外表达情
况；各重组质粒与pcDNA3?-h58L2和pcDNA3?-GFP共转染293FT细胞?检测其形成假病毒的能力；并将各
DNA苗肌肉注射免小鼠?利用假病毒中和实验检测中和抗体水平?用ELISPOT检测细胞免情况。结果显
示?本实验成功构建了五种DNA苗?Lh△c的体外表达量最高?LS和LSM的表达量次之?Lwt没有表达；
重组质粒LS能够形成假病毒?而其他四种重组质粒均不能形成假病毒。LS和Lh均可在小鼠体内诱导中和抗
体?但LS诱导的中和抗体的平均滴度为：6400?明显高于Lh诱导的中和抗体水平（平均滴度为：48）?而其他
苗在小鼠体内未产生中和抗体。对五种苗均未检测出特异性的细胞免反应。结果提示?体外能够组装成假
病毒的DNA苗在免动物后可诱导高滴度的中和抗体?为今后DNA苗的筛选提供参考。
关键词：人乳头瘤病毒58型；密码子优化；DNA苗；假病毒；中和试验
中图分类号：R372?文献标识：A文章编号：000-872（2008）03-096-06
宫颈癌是危害女性健康的第二大恶性肿瘤?宫
颈癌的发生与人乳头瘤病毒（Humanpapillomavir-材料与方法
us?HPV）的持续感染密切相关?95％以上的宫颈癌
病理组织中能够检测到HPVDNA。HPV有001菌株和质粒大肠杆菌DH5α、表达载体pcDNA3?为
多种基因型?根据其致病性不同可将人乳头瘤病毒本室保存；含野生型HPV58L基因的pcDNA3?重组质
分为高危型和低危型两种?高危型HPV感染是引粒Lwt为吉林大学孔维教授惠赠；含密码子优化的L、L2
起宫颈癌的主要原因?包括HPV6、8、3、33、45、基因的质粒p58SHELL为美国国家癌症研究所JohnT?
Schiller教授惠赠。
52、58、59、68等型?其中HPV6和HPV8是最常
2实验动物以及细胞BALB／c小鼠?雌性?6～8周龄?购
见的基因型?能够引起70％以上的宫颈癌。但高危
自本所实验动物中心。293FT细胞由本实验室保存?完全培
型HPV在不同国家流行情况也不同?在我国和一
养基为含0％胎牛血清、％非必需氨基酸、％L-谷氨酸和
些亚洲国家?58型是仅次于6型的第二常见高危％双抗的DMEM高糖液体培养基。
［?2］
型?甚至有报道我国江西省HPV58的检出率与3密子的优化与基因合成利用VectorNTISuite6?0
［2?3］
HPV6相似。软件在不改变蛋白氨基酸序列的情况下?将氨基酸序列按照
目前对于HPV6和HPV8的报道很多?而对哺乳动物细胞偏爱密码子反翻译成核苷酸；若相邻的两个氨
于HPV58的研究还很少?鉴于HPV58在我国宫颈