法半夏配方颗粒PCR反应体系的建立
B.1特异性引物设计
通过测序及从GenBank数据库查找正品半夏物种及半夏常见混伪品（半夏属PinelliaTenore、
天南星属ArisaemaMart.、犁头尖属TyphoniumSchott）ITS序列。用BioEdit软件进行序列比较，
找到半夏特异性SNP位点，设计鉴别引物BX-123aF：5-CGGCGGAGGCACGCAAT-3和BX-123R：5-
AATTCACACCACGTATCGCATTT-3。引物设计如图B.1所示。
图B.1半夏特异性PCR鉴定的引物设计
B.2聚合酶对PCR鉴别结果的影响
不同TaqDNA聚合酶对半夏配方颗粒PCR鉴别的适用性不同，使用2×T5SuperPCRMix（北京擎
科新业生物技术有限公司）、2×M5SuperFastTaqPCRMasterMix（聚合美生物有限公司）、MightyAmp
DNAPolymeraseVer.2（Takara生物科技有限公司）、2×TransStart?FastPfuFlyPCRSuperMix
（全式金生物技术有限公司）进行测试，结果仅2×M5SuperFastTaqPCRMasterMix在半夏药材、
半夏配方颗粒浸膏、半夏配方颗粒中均能扩增出123bp的单一鉴别条带（图B.2）。
图B.2不同聚合酶种类对半夏特异性PCR鉴别结果的影响
M:Trans2KDNAMarker；Pt：半夏；PtE（河北安国）：法半夏配方颗粒浸膏；PtG：法半夏配方
颗粒；Pp：虎掌南星（河北霸州）；Ae：天南星（湖南慈利）；Td：水半夏（广西玉林）；Tg：白附子（辽
宁）；N：空白对照。
B.3方法的适用性考察
采用标准所述体系对不同来源的半夏配方颗粒进行鉴定，所有半夏配方颗粒均可扩增获得123bp
特异性鉴别条带，混伪品配方颗粒在相应位置上均无扩增条带(图B.3)。
图B.3不同企业、批次半夏及其混伪品配方颗粒鉴定结果
M.Trans2KDNAMarker；1～3：法半夏配方颗粒浸膏；4～23：法半夏配方颗粒；24～27：清半
夏配方颗粒；28～34：制天南星配方颗粒；35～37：制白附子配方颗粒；38～39：附片配方颗粒；N：
空白对照。