职业教育医学生物技术专业教学资源库实验PCR扩增人谷胱甘肽转移酶基因一、实验原理利用反应温度的变化，在PCR反应体系共同存在的条件下，经过变性、退火、延伸三个过程的循环，耐热TaqDNA聚合酶催化待扩增DNA合成的反应，以达到对靶序列的体外大量扩增。谷胱甘肽转移酶是细胞抗损伤、抗癌变的主要解毒酶之一，其基因多态性（某位点发生碱基变化）的存在可引起其表达此酶的活性不同，导致解毒功能发生改变，从而增加特定肿瘤发病风险。

职业教育医学生物技术专业教学资源库二、实验试剂（一）PCR扩增反应试剂1.模板DNA（10μg/mL）以EDTA抗凝血为样品，从中提取人类基因组DNA2.引物（10μmol/L）上游引物序列：5’-GCAGCATGTGGCACCATCTC-3’下游引物序列：5’-AGAGCCATGGACCCCCACAC-3’预测扩增产物长度：420bp3.TaqDNA聚合酶（2.5U/μL）4.dNTPs（2.5mmol/L）5.10×PCRbuffer6.双蒸水

职业教育医学生物技术专业教学资源库二、实验试剂（二）PCR产物检测试剂1.琼脂糖（电泳级）：琼脂糖凝胶的孔径可以通过琼脂糖的浓度来控制，浓度越高孔径越小。

职业教育医学生物技术专业教学资源库二、实验试剂2.电泳缓冲液：维持电泳环境中溶液pH的稳定性，抑制核酸酶的活性，防止DNA的降解，有利于核酸分子的迁移。

职业教育医学生物技术专业教学资源库二、实验试剂3.核酸荧光染料：EB（溴化乙锭：强致癌剂，操作时戴手套）或GelGreen，能特异结合核酸在紫外灯下发出荧光。4.上样缓冲液（6×LoadingBuffer）：甘油可增加样品密度，使其比重增加，确保样品均匀沉入胶孔内；溴酚蓝可以使样品呈色，加样操作更为方便，在电泳中呈现指示带，可预测样品电泳的速度和位置。5.DNAmarker（核酸分子量参照物）：根据扩增条带的大小来选择合适的DNAmarker。

职业教育医学生物技术专业教学资源库三、操作步骤（一）采血（二）提取人类白细胞基因组DNA（模板）（三）配制反应体系，在PCR反应管中配制反应体系，混匀并将离心至管底。（四）确定反应条件，在PCR仪上设置反应条件（五）扩增反应，将PCR反应管放入PCR仪中，启动反应条件

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职业教育医学生物技术专业教学资源库三、操作步骤（六）电泳分析结果1.准备电泳缓冲液2.制胶：1.2%琼脂糖，EB终浓度为0.5μg/mL，样品孔置于负极端3.加样：Marker和PCR扩增产物分别加到上样孔内4.电泳：100V，30min5.观察结果

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职业教育医学生物技术专业教学资源库电泳结果分析：

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